第二节黄酮类成分分析.ppt

Ⅰ带 低强峰或带Ⅱ的肩峰 Ⅱ带 245 ~ 270 nm 三、定性鉴别 （一）显色反应 1. 盐酸-镁粉反应 还原反应 例： 牛黄解毒片【鉴别】 取本品6片，研细，加乙醇10mL，温热 10分钟，滤过，取滤液5mL，加镁粉少量与盐酸0.5mL，加热，溶液显红色。（黄芩） 中药的甲醇或乙醇粗提取物常显酱红色，在进行盐酸-镁粉反应时，可观察加盐酸后升起的泡沫颜色，如果泡沫是红色则为正反应。 例： 清喉咽合剂 处方：黄芩、连翘、地黄、麦冬、玄参 【鉴别】 取本品5mL，加醋酸乙酯5mL，振摇提取，分取醋酸乙酯液，置水浴上蒸干，残渣加甲醇2mL使溶解，加镁粉少量及盐酸3~4滴，即显红色。（黄芩苷） 例： 大山楂丸中山楂的鉴别 处方：山楂、六神曲、麦芽 【鉴别】 取本品9g，切碎，加乙醇40mL，置水浴上加热回流10分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水10mL，加热使溶解，加正丁醇15mL振摇提取，分取正丁醇提取液，蒸干，残渣加甲醇5mL使溶解，滤过，取滤液1mL，加少量镁粉与盐酸2~3滴，加热4~5分钟后，即显橙红色。（黄酮类-槲皮素，金丝桃苷） 2. 与金属盐的配位反应 常用下列试剂的醇溶液 硝酸铝 三氯化铝 二氯氧锆 C3-OH、C4=O，C5-OH、C4=O,邻二-OH可与金属离子络合显色。 Al3+、Zr4+能与大多数黄酮类药物产生黄绿色荧光。 例：银黄口服液 处方：金银花、黄芩 【鉴别】（1）取本品1mL，加5%硝酸钠溶液和10% 硝酸铝溶液各0.3mL，生成黄色沉淀；再加5%氢氧 化钠溶液使成碱性，沉淀即溶解，溶液显棕红色。 （黄酮类） （2）取本品0.1mL，加水10mL，摇匀，取溶液 2mL， 加5%二氯氧化锆溶液1~2滴，溶液显黄色，再加盐 酸1~2滴，黄色不褪。（黄酮类） 表示B环无邻二-OH （二）薄层色谱法 常用吸附剂： 硅胶 弱极性药物 聚酰胺 含游离羟基黄酮及其苷 纤维素 多糖苷类混合物 1. 硅胶薄层色谱 在硅胶薄层板上，黄酮类化合物Rf值大小与其极性有关。 在硅胶板上黄酮类Rf 值的比较： ＞ ＞ ＞ ＞ 样品极性大 Rf 小 展开剂极性要大 样品极性小 Rf大 展开剂极性要小 样品极性越大，越易被硅胶吸附 含羟基越多，越容易产生拖尾现象。 措施 * 铺板时加碱液 * 展开剂加酸、水 * 改用聚酰胺TLC法 例： 二陈丸中橙皮苷的鉴别 100:17:13(3cm) 20:10:1:1(8cm) 制备 NaOH 2. 聚酰胺薄层色谱 黄酮类分子中的酚羟基与聚酰胺分子中的 酰胺基形成氢键。 因酚羟基的数目、位置的不同使形成氢键的 能力有差异而得到分离。 聚酰胺 属于氢键吸附 水＞有机＞碱液 展开剂极性应增强。 影响聚酰胺吸附力的因素： 1. 样品分子中酚羟基越多，吸附力↑ 2. 样品的共轭双键越多，吸附力↑ 3. 样品能形成分子内氢键，吸附力↓ 4. 溶剂极性大，吸附力↓ 例： 益心酮片中总黄酮鉴别 （山楂叶提取物） 乙醇-丙酮-水(7:5:6) 显色 例： 双黄连颗粒中黄酮的鉴别 （金银花、黄芩、连翘） 醋酸 四、含量测定 （一）总黄酮含量测定 1. UV法 Ⅰ带 300 ~ 400 Ⅱ带 200 ~ 300 芦丁 (芸香苷) -芸香糖基 例：复方芦丁片中芦丁的含量测定——UV法 （芦丁、维生素C） （0.2mg/mL ） 稀释 用无水芦丁制备标准曲线 VitC的λmax为243nm 测定供试品： 研细 至50mL量瓶 △ 计算： 含水芦丁 无水芦丁 芦丁· 3H2O 2. 比色法 与金属离子络合显色 山楂叶提取的总黄酮 例：益心酮片中总黄酮的测定 A500nm NaOH T.S UV或FR （二）单体黄酮类成分的含量测定 1.薄层色谱法 薄层色谱－ 分光光度法 薄层扫描法 硅胶 聚酰胺 纤维素 例： 银黄注射液中黄芩苷的测定 ——薄层色谱-分光光度法 (点样) 制备标准曲线 正丁醇-乙酸 -水(5:1.5:5) 定位 (吸集器) (刀片) 测定 (A对-A空) 测定供试品： 将测得供试液吸收度（A样-A空）代入回归方程，计算供试液浓度。 2. HPLC法 正相色谱 固定相: 硅胶（键合极性基团