透射电镜技术.ppt

透射电镜技术 Transmission Electronic Microscopy Technique 小组成员 李 丹 李 琨 郭 靖 王艳婷 曹 蕾 指导老师 吴 岩 教 授 2007级电子显微镜技术硕士研究生课程 一、概述 电子显微镜是一种高精密度的电子光学仪器，它具有较高分辨本领和放大倍数，是观察和研究物质微观结构的重要工具。为人类认识世界开辟了更广阔的天地。 二、透射电镜的结构及原理 目前，主流的透射电镜镜筒是电子枪室和由6～8级成像透镜以及观察室等组成。阴极灯丝在灯丝加热电流作用下发射电子束，该电子束在阳极加速高压的加速下向下高速运动，经过第一聚光镜和第二聚光镜的会聚作用使电子束聚焦在样品上，透过样品的电子束再经过物镜、第一中间镜、第二中间镜和投影镜四级放大后在荧光屏上成像。电镜总的放大倍数是这四级放大透镜各级放大倍数的乘积，因此透射电镜有着更高的放大范围（200×～1000000×）。　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 巨噬细胞吞噬细菌的电子显微镜图像 图1 三、透射电镜技术的样品制备 1、超薄切片： 将包埋块中的生物样品切成一定厚度的薄片，在透射电子显微镜下观察细胞的细微结构。以了解不同结构形态、不同功能的细胞内部结构和成分。 2、冷冻复型： 一种制备透射电子显微镜样品的方法。也可称为冷冻断裂或冷冻蚀刻技术。在生物、化学科学等领域，是一项重要的实验技术。 超薄切片技术主要包括取材、固定、包埋、切片、染色等步骤。 冷冻复型技术流程 化学固定 防冻保护 样品冷 冻和断裂 冷冻蚀刻 和冷冻复型 复型膜剥 离和捞膜 图2 光学显微镜与电子显微镜的区别 项目 电子显微镜 光学显微镜 照明光源 电子束 可见光 照明波长 加速电压80kV时，波长 其中紫色光波长400nm 为0.0042nm 分辨率 0.2nm 0.2μm（肉眼分辨0.2mm） 放大倍数 100万倍 1000倍 成像透镜 电磁透镜 玻璃透镜 照明介质 1.33 x 10-4Pa 以上真空度 空气、玻璃、油 焦距调整 调整物镜电流，改变磁场 改变物镜与样品之间距离 强度调整焦距 调焦 样 品 50～100nm超薄切片 厚切片 样品载体 具有支持膜载网 载玻片 The comparison picture of microscope and transmission electron microscope 图3 图4 项目 扫描电镜 透射电镜 分辨本领 70～100 ? 2 ? 放大倍数 20～40