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几种花生根瘤菌菌剂保藏效果的比较 王宝林,詹火元,陶佳喜,郑永良(黄冈师范学院生命科学与工程学院,湖北黄冈438000 摘要将土壤与农家有机肥按6∶4比例混合成肥土,肥土与草木灰按一定比例混合成不同的吸附剂,加入菌液后即成为不同菌剂。将菌剂密封隔绝空气,室温条件下保藏,定时测定其菌量。保藏150d时,测得肥土1号、肥土2号、肥土3号、液体、草木灰5种菌剂的菌量依次为9.1亿、7.5亿、3.3亿、1.1亿和0.3亿/g;菌体存活率依次为85%、69.4%、30.3%、10.2%和2.8%。为比较与研究的方便,引入了存活率和存活率曲线的概念,并对吸附剂的功能和质量要求问题进行了讨论。 关键词花生根瘤菌;菌剂保藏;存活率曲线 中图分类号Q93-336文献标识码 A 文章编号0517-6611(200619-4985-02 1材料与方法 1.1 材料花生根瘤菌(华中农业大学提供;草木灰(无杂质,过80目筛;土壤(菜园土,晒干,去杂质,打碎,过80目筛;农家有机肥料(完全腐熟,含土量低,过80目筛;肥土(过筛土壤与过筛有机肥按6∶4比例混合而成[1]。 1.2 方法 1.2.1 菌种的制备。制备YM A培养基,接种7号花生根瘤菌;制备黄豆饼浸出液培养基,接种8号花生根瘤菌。菌种28℃振荡培养84h。经显微直接计数法测定7号菌菌液的菌 量为10.8亿/m l,8号菌菌液的菌量为32.2亿/m l。 1.2.2 吸附材料的pH值调节和持水量测定。用4%H C l调节草木灰的pH值至6.8~7.0,肥土不进行pH值调节。经测定,肥土的持水量为0.5m l/g,草木灰的持水量为2.2m l/g。 1.2.3 吸附材料的装瓶与灭菌。准备洁净干燥的200m l三角瓶25个,分成5组,每组5个。按表1第1栏内容贴上标签。按表1第2、3栏内容装入吸附材料[2]。装好后加棉塞,包扎好,160~170℃干热灭菌2h。 表15种菌剂各瓶中内容物的名称、数量及计算所得菌量 菌剂名称肥土数量 g 草本灰数量 g 7号菌液数量 m l 8号菌液数量 m l 菌液总量 m l 总重量 g 计算所得菌量 亿/g 肥土1号10000505015010.7肥土2号681721.8438肥土3号42.528.542.5369液体00150015015010.8草木灰050752510015010.8注:肥土1号指肥土∶草木灰=1∶0,肥土2号指肥土∶草木灰=8∶2,肥土3号指肥土∶草木灰=6∶4。 1.2.4 添加菌液,密封,保藏。添加菌液在超净工作台上按表1第4、第5栏要求进行。加菌液后,用宽胶带严密封口,确保隔绝空气,黑暗处室温下保藏5个月[2]。 1.2.5 菌量的测定方法。零时的菌量以计算所得菌量为准(表1。零时以后菌量每30d测定1次,采用平板菌落计数法计数。2结果与分析 2.1 菌量、测定结果和存活率如前述,零时的菌量以计算所得菌量为准,因为它与实测结果差别不大,且不影响对保藏效果的评价。每次测定所得菌量除以零时菌量即得出相对应时间菌体的存活率[3]。5种菌剂各次的测定结果及计算后得出的相对应存活率见表2。 表2花生根瘤菌5种菌剂在不同保藏期的菌量及相对应的存活率 测定日期保藏天 数∥d 肥土1号 菌量∥亿/g存活率∥% 肥土2号 菌量∥亿/g存活率∥% 肥土3号 菌量∥亿/g存活率∥% 液体 菌量∥亿/g存活率∥% 草木灰 菌量∥亿/g存活率∥% 2004-11-20010.7100.010.8100.010.9100.010.8100.010.8100.0 2004-12-203019.6183.214.9138.012.4113.89.386.57.771.2 2005-01-196018.8175.714.0129.912.0110.08.578.3 6.257.4 2005-02-189016.9157.112.6116.811.0100.17.469.0 4.339.8 2005-03-2012013.9130.210.698.17.770.6 3.734.4 1.817.0 2005-04-191509.185.07.569.4 3.330.3 1.110.20.3 2.8 2.2存活率曲线以时间(保藏天数为横坐标,以存活率(0~200%为纵坐标绘制而成的曲线,称为存活率曲线。存活率曲线是一种不规则的曲线,由于保藏期的前、后两段气温稍高,存活率变化较大,中间一段时间气温较低,存活率变 基金项目湖北省教育厅重点研究项目(2003A002。 作者简介王宝林(1944-,男,河南许昌人,副教授,从事微生物教学与研究工作。 收稿日期2006-06-19 化幅度较小,故存活率曲线一般略呈不规则的“S”型。通过存活率曲线