生物化学核酸的生物合成.ppt

13.1 DNA的生物合成 13.1.3 DNA的损伤与修复 1.DNA的修复—是指在一定条件下，生物体使损伤的DNA恢复回正常状态的过程。 重组修复：又称复制后修复：当DNA的双链中的一条链出现大段的损伤时，可以置换一段相当完整的多核苷酸片段上去。（受损伤的DNA在进行复制时，跳过损伤部位，在子代DNA链与损伤相对应部位出现缺口。通过分子间重组，从完整的母链上将相应的碱基顺序片段移至子链的缺口处，然后再用合成的多核苷酸来补上母链的空缺，此过程即重复修复。并非完全校正。） 复制 重组 补缺 13.1 DNA的生物合成 13.1.3 DNA的损伤与修复 1.DNA的修复—是指在一定条件下，生物体使损伤的DNA恢复回正常状态的过程。 修复的意义： 通过修复可以使受损的DNA恢复到原来正常状态。否则的话，就会生病甚至危及生命。 有一种人，缺乏限制性内切酶，如果长期受紫外光照射，易患着色性干皮病（一种皮肤癌——皮肤粗裂、干燥、肉露出来）。 13.1 DNA的生物合成 13.1.4 聚合酶链式反应技术与DNA扩增 聚合酶链式反应（polymerase chain reaction,PCR）是一种体外模拟自然DNA复制过程的核酸扩增技术，即无细胞分子克隆技术。PCR技术由Mullis于1985年发明，它以待扩增的两条DNA链为模板，4种脱氧核苷酸为底物，由两个可与模板双链上相对链侧翼序列杂交的引物介导，通过DNA聚合酶（常用的是Tap聚合酶)的酶促反应，快速体外扩增特异的DNA序列。PCR技术中的每轮循环包括变性、复性和延伸3个阶段。 变性：　反应混合物被短期（15—30秒）加热至950C,使得模板双链DNA变性形成可作为DNA合成的单链。 复性：　混合物被迅速冷却到某一温度，该温度允许引特结合到模板DNA的侧翼序列上。 延伸：　混合物的温度被升到700C（通常），并在预先设定的时间内保持该温度，使得DNA聚合酶通过拷贝单链模板延伸个引物。因此在反应结束时，两个单链模板都形成双链，双链的新生链下延伸的长度是可变的。 聚合酶链式反应技术与DNA扩增 合成方式 13.2 RNA的生物合成 转录——以DNA为模板合成 RNA ， 是生物体内合成的主要方式。 复制——以RNA为模板合成RNA， 此方式常见于病毒中。 转录特点： 不对称转录：转录时，双链DNA中只有一条链作为转录的模板，这种转录方式称作不对称转录。 模板链及反义链：指导RNA合成的DNA链为模板链，又称反义链。编码链及有义链：不作为转录的另一条DNA链为编码链，又称有义链。 由于基因分布于不同的DNA单链中，即某条DNA单链对某个基因是模板链，而对另一个基因则是编码链。 部分转录：RNA在转录时每次只转录DNA上的一部分信息 这种转录方式称做部分转录。 13. 2 RNA的生物合成 13.2.1 转录 13. 2 RNA的生物合成 13.2.1 转录 13. 2 RNA的生物合成 a 不对称转录 b 部分转录 转录示意图 转录酶——RNA聚合酶（DDRP） 模板: 单链DNA模板 底物： 四种NTP 辅因子： Mg2+/Mn2+ 合成方向： RNA 5→3 作用： 连接方式-- 3‘，5磷酸二酯键 RNA起始核苷酸： 5′—末端的常为GTP或ATP （DNA分子中第一个被转录的碱基为C或T） 13. 2 RNA的生物合成 13.2.1 转录 原核生物（大肠杆菌）的RNA聚合酶 组成 分子量 功能 全 酶 核 心 酶 α β β’ ? σ 数目 2 1 1 1 1 36.5KD 150KD 160KD 70KD 11KD 识别起始位点 功能不清楚 与DNA模板结合 起催化作用 与启动子结合 ρ 6 46KD 终止因子 全酶（ α2ββ’σ） =核心酶（ α2ββ’）+ 起始因子（σ） 真核生物的RNA聚合酶 分子量(KDa) 转录产物（前体） 种类 分布 A(I) B(II) C(III) 核仁 核质 核质 不敏感 (10-3 mol/l) 高度敏感 (10-9 -10mol/l) 中度敏感 (10-4-5 mol/l) rRNA(18s ,28s,5.8s) hnRNA tRNA,5srRNA 性质 活性 50～70％ 20～40％ 10％ 500 ～700 ～700 反应条件 低离子强度要求 Mg2+或Mn2+ 高离子强度 高Mn2+浓度 α—鹅膏蕈碱效应 13. 2 RNA的生物合成 13.2.1 转录