微生物工程概述.pptVIP

《课程安排》 ;《微生物工程的概念》;《要点》;《生物物质产生菌的筛选》;1.微生物是生物活性物质的丰富资源;2.标本采集;《菌种筛选主要步骤》;发酵实验↓确定发酵培养基础条件筛选 ↓初筛（1株1瓶）↓复筛（1株3～5瓶）↓结合初步工艺条件摸索再复筛（1株3～5瓶）↓3～5株↓生产性能试验↓毒性试验↓ 菌种鉴定;采样季节：以温度适中，雨量不多的时节 采土方式：在选好适当地点后，用小铲子除去表土，取离地面5-15cm处的土约10g，盛入清洁的塑料袋中，扎好，标记，记录采样时间、地点、环境条件等，以备查考。采样后及时回去分离。;《从自然界采集》;科文学院;土壤的物质组成;农田土壤上层15cm处微生物数量和生物量 ;土壤中微生物的分布;根际微生物; 根际rhizosphere 由植物根系与土壤微生物之间相互作用所形成的独特圈带。它以植物的根系为中心聚集了大量的细菌、真菌等微生物和蚯蚓、线虫等土壤动物，形成了一个特殊的生物群落。 根土比(R∶S) 根际微生物在数量和质量上都与根际以外的微生物不同。根际微生物数量常比根际以外的微生物数量高几倍至几十倍,个别的细菌群可高达上千倍(平板计数)。这两者的数量比称为根土比(R∶S),表示植物根系对微生物的影响程度，所以又称根际效应。 ;土壤剖面结构与微生物垂直分布;从堆肥中分离嗜热菌;日本 新泻县，石油降解菌;日本 八幡平，嗜热菌;玉川温泉;海洋生物工程研究所（Marine Biotechnology Institute）;海鞘;山西省，运城，硝池，嗜盐菌;中国的死海;烟台的盐场;徐州市 铜山新区 奎河（环境污染物降解菌）;3.标本的预处理;3.标本的预处理;2.2 菌种的分离;自然界标本是微生物的混杂物 （优势菌株—非优势菌株） 优势菌株——直接在平板培养基上划线 非优势菌株——富集培养，施加压力，不利于其他菌株的成长，使目标菌株成为优势菌株。例如碳源利用的控制，可选定糖，淀粉、纤维素，或者石油等，以其中的一种为唯一碳源，那么只有利用这一碳源的微生物才能大量正常生长，而其它微生物就可能死亡或淘汰。;1. 施加选择压力??离法;Actinomycete;青霉素;革兰氏阳性菌;《培养方法》;《培养方法》;《培养方法》;液量 基质浓度 保持一定;;2.2 菌种的分离;2. 随机分离法（随机但要有经验）;抗生素产生菌的分离（高灵敏度实验菌） 抑菌圈法，稀释法，扩散法，生物自显影法 抗肿瘤药物（借用抗生活性筛选） 生化诱导法（BIA）：酶活性分析检测DNA损伤 SOS生色检验法：生色反应检测DNA损伤 酶抑制剂 靶酶筛选法 抗病毒药物（作用于核苷酸者毒性高） 病毒表面，病毒特有的DNA合成酶 生长因子（影印法） 培养→影印→杀死→接缺陷性→生长圈→ 找对应菌落 ;《抗生素产生菌的分离》;抗生素产生菌的筛选过程;大多数放线菌的分离培养是在贫脊或复杂底物的琼脂平皿上进行的。一般培养4-20天时在平皿上缓慢形成菌落。 在放线菌分离琼脂中通常都加入抗真菌剂或放线菌酮，以抑制真菌的繁殖。 选择性地添加抗生素，抑制细菌的繁殖。 琼脂平皿制备好后，一般皆应在37℃培养箱中存放3天。;土样中放线菌的非选择性分离：土样风干，磨碎，无菌海绵压印土样后压印平皿，培养。 植物体上放线菌的分离：取植物组织，干燥以减少细菌数量，剪碎植物材料后植入平皿表层培养。也可洗下微生物后振荡培养。 水中放线菌的分离：为使所要分离的放线菌的数量种类增多，一般将水样离心或滤纸过滤，浓缩后涂布于平皿上。 ;菌落形成后可根据肉眼可见的菌落形态上的差异，作初步的鉴定和区分。 通过高倍放大进行镜检，可了解气生和营养孢子形成情况。 成功地分离出各种不同的放线菌属及种的关键是所采集样本的本身及其分离用的琼脂培养基 将分离平皿上所形成的菌落用经火焰灭菌的接种棒或无菌牙签挑取，点接到琼脂平皿上进行影印培养，以进一步筛选和分离。;《放线菌菌落形态》;《抗生素抗性菌——人类》;《抗生素抗性菌——人类》;《真菌分离》;《真菌分离》;抗肿瘤药物产生菌的分离;抗肿瘤药物基本上作用在核酸生物合成上，微生物与人类的核酸结构和生物合成相似性大，可借用抗生活性筛选抗肿瘤药物。 生化诱导法（BIA）：酶活性分析检测DNA损伤 (Bacteria Inhibition Assay);抗肿瘤药物产生菌的分离;酶抑制剂产生菌的分离;生长因子产生菌的分离;《要点》;koko;注意事项 从自然界中分离微生物伴随着危险;注意事项 避免单独行动 利用公共交通 确保联络手段 通知当地管理人员;《对实验室的要求》;生物安全操作柜;维持正压的实验衣;病毒;自然界的一些微生物是在一