发酵过程控制工艺学讲义.pptVIP

1、临界氧浓度 临界溶氧浓度：当培养基中不存在其他限制性基质时，不影响好氧性微生物生长繁殖的最低溶解氧浓度称为临界氧浓度。 而微生物发酵的最适氧浓度与临界氧浓度是不同的。 最适氧浓度：溶解氧浓度对生长或产物合成的最适的浓度范围。 为了避免发酵处于限氧条件下，需要考查每一种发酵产物的临界氧浓度和最适氧浓度，并使发酵保持在最适氧浓度范围。这样便可减少批次之间的波动和更有效地利用空气动力。 需氧发酵并不是溶氧愈大愈好。溶氧较高虽然有利菌体的生长和产物的合成，但当溶氧水平太大,有时会抑制产物的形成。 2、溶解氧浓度的变化规律 在设备和工艺条件不变的情况下，发酵过程中溶解氧的变化有一定的规律。 1）在发酵前期：由于产生菌大量繁殖，需氧量不断大幅度增加，此时需氧超过供养，溶氧明显下降，溶氧曲线出现一个低谷。 2）过了生长阶段，一般需氧量略有减少，溶氧随之上升，次级代谢产物开始形成。 发酵中后期，溶氧浓度明显受工艺控制手段的影响，如补料的数量、时机和方式等。如，在补糖后，菌体的需氧量增加，引起溶氧下降，其下降幅度与菌龄、补糖量及补糖前的溶氧浓度都有关系。如工艺控制不合适，不断地大量补糖，会使溶氧浓度低于临界氧浓度，此时溶解氧就会成为生产的限制因素。 3）在发酵后期，由于菌体衰老，呼吸减弱，溶氧浓度也会逐步上升，一旦菌体自溶，溶氧就会明显地上升。 3、发酵异常时的溶氧变化 发酵过程中若有染菌、污染噬菌体、菌体代谢异常、加油器失灵等异常情况出现，都可能引起溶氧浓度的异常变化。 1）发酵液中污染好气性杂菌，溶氧浓度会在短时间内跌到零值附近，且长时间不能回升，这比用无菌试验来反映杂菌情况要快4~8h。 2）但不是一染菌溶氧就会有大幅度的下跌，要看所染杂菌的种类和数量，还要看杂菌和产生菌谁占优势。有时染菌也会出现溶氧反而升高的现象，这是因为生产菌受到杂菌抑制，而杂菌本身又非十分好气。这样生产菌的呼吸大为减弱而使溶氧上升。这种情况在污染噬菌体的发酵液中更为灵敏，更早地发出预报。 3）补料或加油在供氧不良的罐内也会引起溶氧迅速降低,若溶氧原来就较低就容易降至零。一般1~3h溶氧回升，这可与染菌时的溶氧变化相区别。 4）某些设备故障也会引起溶氧的变化。例如自动加油器失灵，大量漏油，会引起溶氧迅速下降。 二、溶解氧浓度的控制 要控制发酵液中的溶氧浓度，从供养与需氧两方面着手。 影响氧传递系数的一些因素 1、搅拌 搅拌的作用是把通入的气体打碎，强化湍流程度，使空气与发酵液充分混合，气、液、固三相更好地接触，增加了溶氧速率，使微生物悬浮混合均匀，促进代谢产物的传质速率。 2. 慢速利用碳源 为菌体缓慢利用，有利于延长代谢产物的合成，特别有利于延长抗生索的分泌期。 需要控制浓度，分批投料。 （二）碳源浓度的控制 补糖的数量，应使发酵液中所含的糖量能维持菌体的正常生理代谢，并能防止抗生素的生产能力衰退。 一般控制法 动力学模型控制法 1、一般控制法： “中间补糖”法。 决定补糖的参考参数有：糖的消耗速率、pH变化、菌体浓度、菌丝形态、发酵液粘度、溶解氧浓度、消沫油使用情况、罐内发酵液实际体积等。 开始补糖时间：根据代谢变化的情况来确定。 补糖数量：以控制菌体浓度略增或不增为原则，使产生菌的代谢活动有利于抗生素的合成。 补糖方式：连续滴加补入、少量多次间歇补入、大量少次补入等。 2、动力学模型控制法： 根据菌体比生长速率、糖比消耗速率以及抗生素比生产速率等动力学参数来控制加糖。 需建立动力学模型，在实际生产上应用较少。 二、 氮源浓度变化及其控制 1．补加有机氮源 根据产生菌的代谢情况，可在发酵过程中添加某些具有调节生长代谢作用的有机氮源，如酵母粉、玉米浆、尿素等。 2. 补加无机氮源 补加氨水或硫酸铵是工业上的常用方法。 补充方式与补碳源类似，以达到最佳生产为目标。 三、磷酸盐浓度的影响与控制 微生物生长良好所允许的磷酸盐浓度为0.32～300mmol，但对次级代谢产物合成良好所允许的最高平均浓度仅为1.0mmol，提高到10mmol，就明显地抑制其合成。 磷酸盐浓度的控制，一般是在基础培养基中采取适当的浓度。 生长亚适量的磷酸盐浓度：对菌体生长不是最适合但又不影响生长的量。 四、前体的影响与控制 为了抑制抗生素产生菌的生物合成方向及增加抗生素产量，在一些抗生素发酵过程中加入化学前体物质。 如为了提高苄青霉素的产量在青霉素发酵中加入苯乙酸等。 发酵过程中加入的前体数量一次不宜太多，必须采用少量多次或者连续流加的方式加入。 第四节 温度的影响与控制 一、温度对发酵的影响 1、影响各种酶反应的速率和蛋白质的性质。 （1）在一定范围内，随着温度的升高，酶反应速率也增加，但有一个最适温度