猴头菌子实体和菌丝体多糖的分离纯化与理化特征的比较.docVIP

菌物系统20 398 菌物系统20卷 1.3主要仪器 756分光光度计LBS—100自动部分收集器 上海国际微电子公司上海新 波无线电厂上海医疗器械厂SIGMA公司产品 SIGMA公司产品Waters公司IR-611 SICO-GC ·?à?oí′??ˉ 1.4.1 多糖的提取分离: 分别称取风干后的猴头菌固体培养菌丝体和子实体适量 加热提取,合并提取液90%乙醇沉淀得 子实体和菌丝体的提取分离物从固体培养菌丝体得到的提取物编号为HMP ?óè?100ml 蒸馏水抽滤 滤液用3~4倍体积的10%H2O2进行脱色脱色完成后用Sevage法去蛋 白5:2v/vè?é?2?èüòo·′?′Yíè?5-6次至游离 蛋白质完全去除104中 再对蒸馏水(中间最好换几次蒸馏水 透析一天加入三倍体积的60%乙醇沉淀离心收集沉淀静置过夜 用乙醇50加热溶解沉淀同时挥发残留的乙醇制 得样品液 以Sephadex G-100作柱填料上柱处理以0.06ml/min为准以0.05mol /L 氯化钠洗脱用苯酚-硫酸法检测吸收 值为纵坐标画出洗脱曲线流水透析无水乙醇沉淀沉淀 用无水乙醇得子实体多糖纯品hfp-1 由于hfp-2和hmp-1的量极微小 1.4.3纯品鉴定: 将hfp-1和hmp-2两个样品经0.001mol/LNaOH溶解后 HPLC的条件为流速0.5ml/min ±??aWaters 515 HPLC Pump 1.5性质测定 1.5.1比较两提取物得率和多糖含量差异: 分别测出HFP和HMP两提取物的干重 用苯酚 1.5.2 hfp-1和hmp-2单糖组成分析: 用气相色谱法对两分离纯化物进行单糖的组成分析 阿拉伯糖甘露糖葡萄糖等六种单糖混合溶液进行气相色谱分析 GC条件为FID检测 110减压蒸发去酸 NaBH4室温下还原2.5hè?oóòò?￡?ˉ 1.5.3hfp-1和hmp-2的分子量测定: 用不同标准分子量之葡聚糖Dextran T系列 3期杨焱等 作对照由 LgMw对Rt作图获得标准曲线由GPC ????μ?·?×óá? ?úoìía1a?×ò?IR-611上测定 HFP和HMP?á1? è?±í1所示 % % ??1KG猴头菌子实体能得约44.36克的纯多糖子实体提 取的有效率是菌丝体的三倍多 2.2 HFP和HMP的性质比较结果 粗多糖HFP 260nm及280nm处均无紫外吸收 将hfp-1和hmp-2两个样品经0.001mol/LNaOH溶解后HPLC分析结 果显示hfp-1有两个峰次峰含 量为3.94%hmp-2有两个峰次 峰含量为5.54% 由HPLC层析图谱对照标准品的保留时间hmp-2主 峰分子量为68000 í?4??ì???ì?ì?????μ￥ì? 0.040.71 í?5??ì?°?èéì? Ara, Xyl, Man, Gal,Glcμ??|??±è?a0.250.310.29 400 菌 物 系 统 20卷 　 图1 hfp-1的HPLC 纯度分析图 图2 hmp-2的HPLC 纯度分析图 Fig.1 HPLC of hfp-1 Fig.2 HPLC of hmp-2 　　 图4 hfp-1的气相色谱图 图5 hmp-2的气相色谱图 Fig.4 GC of hfp-1 Fig.5 GC of hmp-2 从HFP 和HMP 主成分的单糖组成上看猴头菌丝体多糖比子实体多糖 多一个木糖组分 子实体多糖以半乳糖和葡萄糖为主 红外光谱结果显示hfp-1和hmp-2均含有多糖的3300cm -1 1417.4 cm -1特征吸收峰外-型连接的890 cm -1吸收峰-型吸收峰hfp-1在1373.1 cm -1处有一明显的吸收 3期杨焱等 存在着不同的酶因此从菌丝体或子实体 中获取的化学成分就会有差异 有关猴头菌子实体和菌丝体的化学成分的研究已有一些报道 石勇民和苏凤岩从猴头菌子实体中提取得到的多糖经水解层析显色后得出由等量的葡萄糖和半乳糖组成1987 黄年来认为猴头菌子实体多糖是由葡萄糖潘继红 等甘露糖半乳糖和葡萄糖 阿拉伯糖和半乳糖 　 在已有的研究报道中菌丝体多糖的研究较少 因此本实验对 二者的化学成分组成差异进行了全面的研究 多糖的含量相差较大将子 实体和菌丝体提取分离得到的多糖进一步纯化后 阿拉伯糖这与以往研究报道有所差异 甘露糖半乳糖和葡萄糖五种单糖组成的 本研究通过单糖组成摩尔比的计算得出 菌丝体多糖主要以半乳糖和木糖为主本实验用 HPLC对猴头菌子实