2 显微镜的使用.ppt

实验一 普通光学显微镜的构造和使用方法 实验目的和要求 掌握和了解显微镜的工作原理和结构，了解显微镜的构造和各部分的作用 了解显微镜在细胞生物学领域中的应用情况 掌握显微镜的操作方法和保养措施 1、约400多年前，眼镜片工匠们制造放大镜，放大倍数为3-4倍。这种原始的尝试将人类的视力引向了微观世界的领域。显微镜的出现促进了几何光学、波动光学、变换光学和光谱学的理论知识的进展。 在实践中，R. Hoock、Leauwenhoeck等用显微镜发现了植物细胞、动物的精子、红细胞、胃、肺的组织结构。 显微镜的发展简史 2、17世纪末叶到18世纪初荷兰物理学家惠更斯（Huygens、惠更斯目镜）为显微镜的发展做出了杰出的贡献。 3、19世纪末德国学者E.阿贝（Abbe)奠定了光学显微镜的成像原理，使用油浸系物镜使光学显微镜的分辨本领达到了最高极限。 4、20世纪中叶，出现了以短波长、高能量的光线作为光源的荧光显微镜和紫外光显微镜，由于光源的波长的缩短，提高了显微镜的分辨本领。 5、电子显微镜：沿着波长缩短可以提高显 微镜分辨率的方向，产生了应用高能电子束作为光源的电子显微镜，极大地提高了显微镜的分辨能力。但是在研究生命的过程中仍然具有其局限性如只能观察死的细胞形态，活细胞的增殖、分化、能量代谢游走运动、吞噬活动等呼唤着更好的显微镜的出现。 普通光学显微镜的基本结构 普通光学显微镜的构造可分为两部分：一为机械装置，二为光学系统 。 机械装置由镜座、镜筒、物镜转换器、载物台、推动器、粗动螺旋和微动螺旋等部件组成。 光学系统由目镜、物镜、聚光器、光源、滤光片、虹彩光圈等组成 。 普通光学显微镜基本构造 显微镜的光学原理 显微镜总放大倍率＝物镜放大倍率×目镜放大倍率 显微镜的分类 现代显微镜可以分为两大类：一类是光学显微镜，另一类是非光学显微镜 。这两类显微镜又可根据不同的情况分成若干类型 如表1-1所示。 明场观察——常规染色片（HE染色等） 暗场观察——微粒外观（细菌记数等） 相差观察——活细胞标本（细胞培养等） 偏光观察——双折射物质（晶体检测） DIC观察——活细胞等（细胞培养，显微操作等） 霍夫曼观察 ——显微操作 荧光观察 ——物质鉴定（抗体抗原、荧光原位杂交<FISH>等） 显微镜的观察方式 显微镜的使用方法 （一）显微镜的使用 1.取镜和安放 置显微镜于平稳的实验台上，镜座距实验台边沿约为3~4cm。镜检者姿势要端正。 （取、放显微镜时应一手握住镜臂，一手托住底座，使显微镜保持直立、平稳。切忌用单手拎提；且不论使用单筒显微镜或双筒显微镜均应双眼同时睁开观察，以减少眼睛疲劳，也便于边观察边绘图或纪录。） 2.低倍镜的操作 置显微镜于固定的桌上，接通电源，打开光源。 将标本片放在载物台上，用标本夹夹住，调节标本移动螺旋，使观察的目的物处于物镜的正下方。 调节粗调螺旋，使物镜（10×）与标本靠近，眼睛在测向注视物镜，防止物镜和载玻片相碰。 张开双眼向物镜里观察，如果见到目的物，但不十分清楚，可用细准焦螺旋，至目的物清晰为止。 通过玻片夹推进器慢慢移动玻片，认真观察标本各部分，找到合适的目的物，仔细观察并记录所观察到的结果。 3.高倍镜的操作 使用高倍镜前，必须先用低倍镜观察，发现目的物后将它移至视野正中处。 旋动转换器换高倍镜。如果高倍镜触及载玻片立即停止旋动，这说明原来低倍镜并没有调准，目的物并没有真正找到，必须用低倍镜重新调节。如果高倍镜下观察目的物有点模糊，调节细准焦螺旋，直到视野清晰。调节细准焦螺旋时要注意旋转方向与载物台上升或下降的关系，防止镜头与载玻片强力接触，损坏镜头或载玻片。 4.油镜的操作 如果用高倍镜目的物未能看清，可用油镜。先用低倍镜和高倍镜检查标本片，将目的物移到视野正中。 在载玻片上滴一滴香柏油，将油镜移至正中，缓慢调节粗调螺旋使油镜头浸没在油中，刚好贴近载玻片。然后再用细准焦螺旋微微向上调（切忌不用粗准焦螺旋）即可。 油镜观察完毕，用油镜纸将镜头上的油揩净，另用擦镜纸蘸少许二甲苯揩拭镜头，再用擦镜纸揩干。 5.换片 观察完一个标本后，如果想要再观察另一标本时，需先将高倍物镜（或油镜）转回到低倍物镜，取出标本，按放片的方法换上新片，即可观察。千万不可在高倍物镜（或油镜）下换片，以防损坏镜头。 6 显微镜使用后的整理 观察结束后，调节光源到最小再关掉电源开关。调节粗调螺旋，使载物台下降到最低，取下玻片，擦干净镜体，罩上防尘罩，然后放回原处。 显微镜的保养及注意事项 （1）用绸布将镜身擦拭干净（切不可用手擦拭），除去灰尘、油污、水汽，以免生锈长霉。 （2）使显微镜的各部件恢复回原位，下降镜筒，使物镜呈“八”字形置于载物