HPLC-NMR联用技术及其应用示例.pptVIP

* * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * HPLC-NMR技术及其应用示例 温新潮 201381800013 内容摘要 HPLC-NMR出现的意义以及特点 1 HPLC-NMR的发展过程 2 HPLC-NMR装置 3 HPLC-NMR在实际应用中面临的 主要技术问题以及解决方法 4 HPLC-NMR操作模式和技术 5 HPLC-NMR在在蛇葡萄根提取混合物中的应用研究 6 1、HPLC-NMR出现的意义 高效液相色谱是分析复杂有机物、药物和生物大分子等混合物的一种重要手段，但如果使用通常的检测器如紫外、荧光、电化学等检测器只能得到非常有限的分子结构信息。 NMR能够提供大量的分子结构信息，但NMR分析方法要求样品为纯品，对于复杂的混合物，因为NMR信号会互相重叠覆盖，单纯依靠NMR谱则显得无能为力。 如果在核磁共振仪器前加一个一级色谱分离设备把直接样品分离后再送入NMR中扫描，就可以大大简化分析程序，提高样品分析速度。 1、HPLC-NMR出现的特点 优点 1.分离和结构解析 2.对光、氧不敏感 HPLC-NMR联用 缺点 1.灵敏度低 2.线宽与流速有关 3.多溶剂信号突出 4.耗时 2、HPLC-NMR的发展过程 70年代末 第一次有人将 HPLC-NMR联用 80年代末 HPLC-NMR技术才作为一种有效的分析手段而得到了承认 最近几年 HPLC-NMR的分析方法已经被证明为生物化学和药物化学分析中最重要的分子结构鉴定方法之一 3、HPLC-NMR装置 典型的HPLC-NMR联用装置是由泵、注入阀、色谱柱和紫外检测器组成LC系统，通过2-2.5m长的特制毛细管连接到NMR液相探头上。可以将NMR视为HPLC的特殊检测器，其化学位移、积分强度和谱线分裂情况能提供丰富的定量定性信息。位于NMR探头底部的阀门用来控制NMR测试是在停流状态下还是在连续流动状态下进行。 传统NMR探头与HPLC-NMR探头比较 NMR探头是装置中最关键的部分。传统的NMR探头样品管在一个与测量线圈相连的玻璃插件内旋转。 HPLC-NMR探头是一个不旋转的直接固定在射频线圈上玻璃管构成的，他处于传统探头玻璃杜瓦瓶中心，玻璃管内径为2.3或者4mm。玻璃壁长度至少超过质子检测线圈（18mm），并与之平行，同时向两端逐渐变细。由于射频线圈直接固定在检测池在玻璃管上，NMR线圈的体积和试样体积比，既所谓的填充因子接近最佳值，这种类型的NMR测定探头原则上是最灵敏的。 4、HPLC-NMR在实际应用中面临的主要技术问题以及解决方法 （一）HPLC高浓度溶剂的NMR信号抑制 1.大多数HPLC体系都是采用反相色谱柱，两元的或三元的体系作为流动相，这些强溶剂峰使得被分析成分的NMR信号变差，且强的溶剂峰所伴随的13C卫星峰也会干扰有用信号的观察。 2.实验过程中流动相梯度会引起某些溶剂峰化学位移的移动。 4、HPLC-NMR在实际应用中面临的主要技术问题以及解决方法 与HPLC的常规用量相比，NMR检测所需的样品量是非常大的。在HPLC-NMR操作中，较大的HPLC进样量和较长的HPLC流动时间会造成色谱峰的展宽。 理想的进样量应尽可能小地取得好的HPLC的分辨率，同时又应该尽可能大地满足NMR检测的需要。这个问题可以通过选择最佳进样量以及优化其他操作条件来部分的解决。 （二）避免损伤色谱分析的分辨率 4、HPLC-NMR在实际应用中面临的主要技术问题以及解决方法 （三）NMR高灵敏度的需要 NMR的灵敏度大大低于HPLC的常规检测器（如紫外检测器等）灵敏度，如何解决这个矛盾是解决HPLC-NMR技术发展的主要难题之一。 采取适当的操作方式。 例如采用驻流方式可以大大提高系统灵敏度。 使用高频仪器。 现在已出现了800MHZ以上的仪器，灵敏度较以往的仪器有大幅度提高 利用SFC等方法浓缩样品 降低探头温度 4、HPLC-NMR在实际应用中面临的主要技术问题以及解决方法 超临界流体是指处在临界温度，临界压力状态下的物质，这时物理性质介于液体和气体之间。超临界流体技术能够弥补气相和液相分离存在的缺点。 作为流动相的CO2具有廉价，安全和易获取等优点，对低极性或中性物质具有较好的溶解性，适合分析热敏感组分，同时，作为流动相的CO2没有H信号，因此不需要考虑水峰抑制问题。可以一次性完成从样品分离提纯到峰的检测，结构定性和定量分析，并提供混合物的组成和结构信息，从而提高效率和研究灵活性。 利用SFC等方法浓缩样品 4、HPLC-NMR在实际应用中面临的主要技术问题以及解决方法 利用高温超导薄膜材料而制成的超低温探头，当样品温度由温控单元控制时，采用闭环或者开环制冷系统使超导线圈温度降低到