Keap1Nrf2ARE通路相关基因在热诱导的氧化应激小鼠.pdf

ＩＳＳＮ　 １００７⁃７６２６ 中国生物化学与分子生物学报　 ｈｔｔｐ：／ ／ ｃｊｂｍｂ．ｂｊｍｕ．ｅｄｕ．ｃｎ ２０１４年３月 ＣＮ　 １１⁃３８７０／ Ｑ Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ ３０（３）：２８４ ～２９０ Ｋｅａｐ１／ Ｎｒｆ２／ ＡＲＥ通路相关基因在热诱导的 氧化应激小鼠肝脏中的表达 王　 菲，　 黄　 毅，　 李延森，　 曹　 云，　 普少瑕，　 李春梅∗ （南京农业大学动物科技学院，南京　 ２１００９５） 摘要　 为了研究热应激对小鼠肝脏抗氧化功能及 Ｋｅａｐ１ （ｋｅｌｃｈ⁃ｌｉｋｅ ＥＣＨ⁃ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｐｒｏｔｅｉｎ⁃ １）／ Ｎｒｆ２（ＮＦ⁃Ｅ２⁃ｒｅｌａｔｅｄ ｆａｃｔｏｒ２）／ ＡＲＥ （ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｅｌｅｍｅｎｔ）通路相关基因表达的影响，选用３０ 只８周龄雄性小鼠随机分成６组，每 ｄ连续４２ ℃热处理２ ｈ，分别在热处理０ ｄ（对照组）、１ｄ、２ ｄ、 ４ ｄ、８ ｄ和１２ ｄ 时观察肝脏组织形态学和免疫组织化学分析，另取一部分肝脏组织保存于－８０ ℃ 用于后续荧光定量ＰＣＲ 实验，检测肝脏抗氧化指标及Ｋｅａｐ１／ Ｎｒｆ２／ ＡＲＥ通路相关基因的表达．结果 显示：小鼠的体表温度和直肠温度在热处理后都极显著高于热处理前．组织形态学观察发现，热处 理导致小鼠肝脏组织充血和肝细胞水肿．小鼠肝脏氧化应激指标 ＭＤＡ （ｍａｌｏｎｄｉａｌｄｅｈｙｄｅ）含量在热 处理第２ ｄ较对照组显著升高，ＧＳＨ （ｇｌｕｔａｔｈｉｏｎｅ）含量、ＧＳＨ⁃ＰＸ （ｇｌｕｔａｔｈｉｏｎｅ ｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ）活力和总 ＳＯＤ （ｓｕｐｅｒｏｘｉｄｅ ｄｉｓｍｕｔａｓｅ）活力在第４ ｄ和１２ ｄ都有升高．免疫组织化学发现，与对照组和第１２ ｄ 组相比，Ｎｒｆ２蛋白在第１ｄ，２ ｄ，４ ｄ，８ ｄ表达明显，其中Ｎｒｆ２蛋白在第４ ｄ表达最为显著． 荧光定量 ＲＴ⁃ＰＣＲ结果表明，与对照组比较Ｋｅａｐ１基因的表达量从热处理第１ ｄ 开始显著降低，Ｎｒｆ２ 基因的 表达量在第４ ｄ和１２ ｄ显著升高，ＨＯ⁃１ （Ｈｅｍｅｏｘｙｇｅｎａｓｅ⁃１）基因的表达量在第１ｄ显著升高，ＮＱＯ１ （Ｑｕｉｎｏｎｅｏｘｉｄｏｒｅｄｕｃｔａｓｅ）和ＧＣＬＣ （Ｇｌｕｔａｍａｔｅｃｙｓｔｅｉｎｅｌｉｇａｓｅｃａｔａｌｙｔｉｃ）基因的表达量在第１ｄ和４ ｄ显 著升高．上述结果表明，热应激引起了小鼠肝脏氧化损伤，Ｋｅａｐ１／ Ｎｒｆ２／ ＡＲＥ通路可能参与了肝脏 自身缓解热应激的过程． 关键词　 热应激；肝脏；氧化损伤；Ｎｒｆ２；小鼠 中图分类号　 Ｒ１５１３ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ Ｋｅａｐ１／ Ｎｒｆ２／ ＡＲＥ Ｐａｔｈｗａｙ⁃ｒｅｌａｔｅｄ Ｇｅｎｅｓ ｉｎ Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｔｏ Ｈｅａｔ⁃ｉｎｄｕｃｅｄ Ｏｘｉｄａｔｉｖｅ Ｓｔｒｅｓｓ ｉｎ ｔｈｅ Ｌｉｖｅｒ ｏｆ Ｍｉｃｅ ＷＡＮＧ Ｆｅｉ，ＨＵＡＮＧ Ｙｉ，ＬＩ Ｙａｎ⁃Ｓｅｎ，ＣＡＯ Ｙｕｎ，ＰＵ Ｓｈａｏ⁃Ｘｉａ，ＬＩ Ｃｈｕｎ⁃Ｍｅｉ∗ （Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ａｎｉｍａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｎａｎｊｉｎｇ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｎａｎｊｉｎｇ２１００９５，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ　 Ｔｏ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｈｅａｔ ｓｔｒｅｓｓ ｏｎ ｔｈｅ ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ ｆｕｎｃｔｉｏｎ ｉｎ ｒｅｌａｔｉｏｎ ｔｏ ｔｈｅ　 ｍＲＮＡ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ Ｋｅａｐ１ （ｋｅｌｃｈ⁃ｌｉｋｅ ＥＣＨ⁃ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｐｒｏｔｅｉｎ⁃１）／ Ｎｒｆ２ （ＮＦ⁃Ｅ２⁃ｒｅｌａｔｅｄ ｆａｃｔｏｒ ２）／ ＡＲＥ （ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｅｌｅｍｅｎｔ）ｉｎｍｏｕｓｅｌｉｖｅｒ，ｍａｌｅｍｉｃｅｏｆ８⁃ｗｅｅｋｓｗｅｒｅｐｌａｃｅｄｉｎ４２