一种与糖基化CD7抗原结合的纳米抗体的表达和鉴定.PDFVIP

第11卷第11 期 Vol.11 No.11 2018 年6 月 June 2018 一种与糖基化 CD7 抗原结合的纳米抗体的 表达和鉴定 1 2 2 1 1 1 1，3* 吴 超 ，胡思怡 ，周 伟 ，于 远 ，汤金乐 ，安钢力 ，杨 林 （1. 苏州大学唐仲英医学研究院血液学研究中心，江苏苏州 215123 ； 2. 安徽安科生物工程（集团）股份有限公司，合肥 230000 ； 3. 博生吉医药科技（苏州）有限公司，江苏苏州 215123 ） 摘要：目的：研究CD7 纳米抗体VHH6 和人源化纳米抗体huVHH6 与抗原的结合是否依赖于抗原的糖基化。 方法：将CD7 抗原蛋白胞外区序列、纳米抗体VHH6 序列和人源化纳米抗体huVHH6 序列分别构建于pET28a+ 原核表达载体上，然后用大肠杆菌BL21 异丙基硫代半乳糖苷（isopropyl thiogalactoside ，IPTG ）低温诱导表 达，收集细菌后超声破碎。CD7 抗原取菌液超声破碎后的沉淀部分，通过包涵体复性的方法纯化。VHH6 和 huVHH6 抗体直接使用超声破碎后的上清液纯化。为避免酶联免疫吸附测定（enzyme linked immunosorbent assay ，ELISA ）亲和力检测时纳米抗体与CD7 抗原的 His 标签（His-Tag ）冲突，在纳米抗体序列和His-Tag 之间引入一个 TeV 蛋白酶切位点，待纯化抗体后进行酶切和再纯化。将最终不带标签的纳米抗体分别与糖基 化和非糖基化CD7 抗原复合，ELISA 检测亲和力大小。结果：成功构建并表达了足量的纳米抗体，对其进行 酶切后再纯化，获得了高纯度不含标签的纳米抗体，通过与糖基化和非糖基化 CD7 抗原复合后发现，VHH6 和huVHH6 并不能与非糖基化CD7 抗原结合，而只能与糖基化CD7 抗原结合。结论：CD7 纳米抗体VHH6 和人源化纳米抗体huVHH6 与抗原的结合依赖于抗原的糖基化修饰。 关键词：人体免疫学；纳米抗体纯化；酶联免疫吸附测定（ELISA ）；CD7；糖基化 中图分类号：R392.11 文献标识码：A 文章编号：1674-2850(2018)11-1114-09 Expression and identification of a nanobody combined to glycosylated CD7 antigens 1 2 2 1 1 1 1, 3 WU Chao , HU Siyi , ZHOU Wei , YU Yuan , TANG Jinle , AN Gangli , YANG Lin (1. Hematology Center, Cyrus Tang Medical Institute, Soochow University, Suzhou, Jiangsu 215123, China; 2. Anhui Anke Biotechnology (Group) Co., Ltd ., Hefei 2300