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糖基的分离、纯化、检测 曹凯 06. 03 添加文本 点击添加文本 点击添加文本 点击添加文本 聚糖的分离、检测原理 操作步骤、仪器 方法沿革 添加文本 点击添加文本 点击添加文本 点击添加文本 方法沿革 几乎所有的分离糖基的方法都是化学方法，因为尚无适用于所有O链接糖蛋白的酶 最常用的化学方法是β消化法，但是这会导致糖基被还原，生成糖醇，无法进行定量检测 其它方法还有乙二胺、氨、氢氧化锂法，但是分离的量非常少 1. Radoslaw P. Kozak.Improved nonreductive O-glycan release by hydrazinolysis with ethylenediaminetetraacetic acid addition. Analytical Biochemistry,2014,453:29-57 添加文本 点击添加文本 点击添加文本 点击添加文本 分离原理：肼解作用 2.Radoslaw P. Kozak.Suppression of peeling during the release of O-glycans by hydrazinolysis. Analytical Biochemistry,2012,423:119-128 1. Radoslaw P. Kozak.Improved nonreductive O-glycan release by hydrazinolysis with ethylenediaminetetraacetic acid addition. Analytical Biochemistry,2014,453:29-57 添加文本 点击添加文本 点击添加文本 点击添加文本 缺点：退化（peeling） 指每一步中残端减少一个单糖结构 改进方法：肼化前去除水分子并加入低浓度的已二酸已二胺，可以有效降低peeling 试剂准备 样品准备 TIMESHEET 实验步骤 添加文本 点击添加文本 点击添加文本 点击添加文本 试剂准备 主要试剂：Ludger公司LL-HYDRAZ-A2试剂盒 其它试剂：纯水、PD10 色谱柱、离心机、惰性气体（氮气 或氩气）、烘干箱或者通风橱、注射器、加热装置、蒸发装置、移液器 主要仪器：高效液相色谱仪、离子肼质谱 添加文本 点击添加文本 点击添加文本 点击添加文本 样品纯化：透析膜透析或离心，然后用清洗液清洗 样品转移：加到反应瓶中（50ug到1mg）样品烘干 添加无水肼 肼解孵化 N、O糖基具体步骤未附，见说明书 样品制备 添加文本 点击添加文本 点击添加文本 点击添加文本 TIMESHEET 1.转移至反应瓶并彻底烘干 24h 2.添加无水肼 15min 3.孵化 6-16h 4.肼洗脱 2-24h 5.乙酰化 2h 6.纯化分离出的糖基 2h 添加文本 点击添加文本 点击添加文本 点击添加文本 离子肼 质谱检测 进样 HPLC分离 染色 肼化 孵育 洗脱 试剂 仪器 添加文本 点击添加文本 点击添加文本 点击添加文本