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菌种保存和微生物常识 1、 常用培养基的制备、灭菌与消毒 营养：从外部环境摄取其生命活动所必需的能量和物质，满足生长和繁殖需要的一种生理过程。是生命活 动的物质基础，是生命活动的起点。 营养物：具有营养功能的物质。也包插光能。提供生物的结构物质、能量、代谢调节物质和u好的生理环 境。 营养要素：碳源、氮源、能源、生长因子、无机盐和水 培养基：人工配制、适合微生物生长繁殖或产生代谢产物的混合养料。要求：应具备6人营养要素；物质 比例合适；必须灭菌。 2、 选用和设计培养基的原则、方法及制备过程 原则：目的明确、营养悔调、经济节约 物理化学条件适宜 方法：生态模拟、查阅文献 精心设计、试验比较 步骤：称量、熔化、调PH、过滤、分装、 加塞、包扎、灭菌、冷却、无菌检查 培养基种类： 一、 按成分的不同分 天然培养基、合成培养基、半合成培养基 二、 按培养基的物理状态分 固体培养基、液体培养基、半固体培养基 三、 按培养基用途 基础培养基、选择培养棊、加富培养基鉴别培养基 消毒与灭菌： 消毒：消灭病原菌和冇害微生物的营养体 灭菌：杀灭一切微生物的营养体，芽胞和泡子。 方法： 一、 物理的方法：加热、过滤、仙射 二、 化学的方法：用化学试剂抑制或杀火微生物。主耍破坏细菌代谢机能。如重金属离子，碱胺类药物及 抗生素等。 加热法： （1） 干热法：火焰灼烧灭菌和热空气灭菌。 1、 火焰灼烧适用于接种环、接种针和金属用具如银子等，试管口和瓶口，涂布用玻璃棒。 2、 热空气灭菌利用高温干燥空气（160-1700加热灭菌1—2h,适用于玻璃器J【IL和培养川L等。原理加热 使蛋H质变性，与水的含量有关，当环境和细胞含水量越大，凝固越快。 3、 注意事项： 1） 培养基、橡胶制品、塑料制品不能用此法； 2） 温度控制在＜180°； 3） 物品不能太挤； 4） 温度降至70。时才开箱门。 （2） 湿热法：原理：因为湿热中菌体吸水，蛋白质容易凝固，因蛋白质含水量增加，所需凝固温度降低； 湿热的蒸气冇潜热存在。所以效呆比同温度下干热好。 高压蒸汽灭菌法： 1、 设备：高压灭菌锅 2、 时间长短根据火菌物品的种类和数量不同冇所变化。 3、 适用于培养基、工作服、橡胶物品等的灭菌，也可用丁?玻璃器皿的灭菌。 4、 注意事项: 1）冷空气彻底排除；2）加水；3）压力降为“0”时方可打开。 常床蒸汽灭菌：对于不宜用高压蒸汽灭菌的培养基如明胶培养基、牛乳培养基，含糖培养基等对采用此法。 彻底灭菌则采用间歇灭菌方法。 煮沸灭菌法：适用注射器和解剖器皿，时间10-15min, 超高温杀#l：135-150°C和2-8s对牛乳和其它液态食品。优点：保持食品价值和营养成分。 过滤除菌： 原理：介质在冇压力时阻隔微生物。 适用范围：许多材料如血清、抗生素及糖溶液采用此法。 设备：蔡氏过滤器，滤牍过滤器。 优缺点：不破坏培养基成分，只适用少量滤液。需大量无菌空气以及净化工作台。 注意爭项：1、压力适当； 2、 无蘭条件下进行； 3、 防止渗透现彖。 辐射灭菌: 原理：紫外线波长在200-300nm,具有杀菌作用，以265-266杀菌力强。此段波长易被细胞中核酸 吸收；可产生臭氧和过氧化氧。杀菌效力与强度和时间的乘积成正比。 缺点：穿透力不大。距照射物v 1.2m为宜。 应用：无菌室，医院。 注意事项：对眼睛和皮肤有刺激作用。 射线灭菌：r射线，穿透力强，适用于堆积物品的火菌。 化学药品灭菌： 原理：应用化学制剂破坏细菌代谢机能。 杀菌剂如重金屈离子； 抑菌剂如磺胺类及多数抗生索。 注意：与药品的浓度高低，时间长短，微生物种类以及微生物所处的环境冇关。 常用化学杀菌剂冇：乙醇、醋酸、石碳酸 福尔马林、升汞、高猛酸钾、新洁尔灭等 3、微生物的分离、纯化及培养技术 分离与纯化：从混杂的微生物群体中获得只含某一种或某一株微生物的过程。 为什么要进行纯培养：平板上的单一菌落并不一定保证是一种菌。 常用的分离、纯化方法： 单细胞挑取法 稀释涂布平板法 稀释混合平板法 平板划线法 稀释涂布平板法： 步骤： 1、倒平板：牛肉膏蛋白月东培养基,高氏I号培养基,查氏培养棊冷却至55-60°C时,混匀后倒平板，牛 肉膏蛋口陈培养基倒4 Jill?，高氏I号培养基和査氏培养基各倒3 JIILo 2、 制备污水稀释液：10g 土样，加入90ml无菌水中，在三角瓶中振摇20min。取0.5ml加入盛冇4.5ml 无菌水的试管屮，以此类推，制成不同稀释度。 3、 涂布：将上述每种培养基平板底而标记稀释度，然后用无菌吸管从最后三种稀释度，即104 10-5 和10-6的试管中吸取0.1ml对号放入平板上，用玻棒涂布。 4、 培养：高氏I号和查氏倒置培养于28C培养箱中培养3-5days,牛肉育蛋5冻琼脂培