《SCT 3024-2004 无公害食品 腹泻性贝类毒素的测定 生物法》.pdf

SC/T 3024—2004 SC/T 3024—2004 无公害食品 腹泻性贝类毒素的测定 生物法 发布时间：2004 年 1 月 7 日 实施时间：2004 年 3 月 1 日 发布单位：中华人民共和国农业部 1、范围 本标准规定了腹泻性贝类毒素(DSP)的测定方法 — 生物法。 本标准适用于软体动物贝类可食部分中腹泻性贝类毒素(DSP) 的 测定。 2、原理 用丙酮提取贝类中毒素，再转移至乙醚中，经减压浓缩蒸干后， 再以 1％吐温-60 生理盐水溶解残留物，注射小鼠，观察存活情况， 计算其毒力。 3、试剂和材料 3.1 丙酮(分析纯) 。 3.2 乙醚(分析纯) 。 3.3 1 ％吐温-60 生理盐水：称取 1.0 g 吐温-60，溶于生理盐水(0.8 ％ NaCl) 中，并定容至 100.0mL。 4、仪器和设备 4.1 旋转蒸发器。 / SC/T 3024—2004 4.2 均质器。 4.3 磨口烧瓶：圆底，500mL、100mL。 4.4 布氏漏斗：Ф100mm。 4.5 分液漏斗：具塞，500mL 。 4.6 天平：感量 0.1g 。 4.7 刻度试管：10mL，具塞。 4.8 冰箱：0℃～5℃和－15℃～－20 ℃。 4.9 注射器：1mL 。 4.10 注射器针头：8 ＃。 4.11 小鼠：体重为 16g～20g 的健康ICR 系雄性小鼠。 5、检样的制备 5.1 生鲜带壳的贝类 a) 用清水彻底洗净贝类外壳，开壳，用清水淋洗内部去除泥沙 及其他外来杂质，仔细取出贝肉， 切勿割破肉体； b) 收集贝肉，沥水 5min ，捡出碎壳等杂物，迅速冷冻，贮藏备 用； c) 注意不要破坏闭壳肌以外的组织，尤其是中肠腺(又称消化盲 囊，组织呈暗绿色或褐绿色) 。开壳前不能加热或用麻醉剂。 5.2 冷冻贝类 在室温下，使冷冻的样品(带壳或去壳的)呈半冷冻状态，按 5.1 方法清洗、开壳、淋洗、 / SC/T 3024—2004 取肉。 5.3 取样 a) 可以切取中肠腺的贝类(扇贝、贻贝、牡蛎等) ，称取 200g 贝 肉后，仔细切取全部中肠腺，将中肠腺称重后细切混合作为检样，注 意不要使中肠内容物污染案板； b) 对于尚未确定部位毒性的贝类及不易切取中肠腺的小型贝 肉，可将全部贝肉细切、混合，作为检样； c) 为避免毒素的危害，应戴手套进行检验操作，移液管等用过 的器材应在 5 ％的次氯酸钠溶液中浸泡 1 h 以上，以使毒素分解；废 弃的提取液等也应用 5 ％的次氯酸钠溶液处理。 6、提取 6.1 取 5.3a)处理的中肠腺，或 5.3b)处理的 200g 贝肉置于均质杯内， 均质 2min 。 6.2 加 3 倍量丙酮，与样品充分搅拌均匀后，用布氏漏斗抽滤并收 集提取液。对残渣以检样两倍量丙酮再次抽滤两次，合并抽滤液。 6.3 将抽提液移人 500mL 的磨口烧瓶中，减压浓缩(旋转蒸发器，56 ℃)去除丙酮，直至在液体表面分离出油状物。 6.4 将浓缩液移入分液漏斗内，以 100mL～200mL 乙醚和少量的水 洗下粘壁部分，轻轻振荡(不能生成乳浊液) ，静置分层后，去除水层 (下层) ，用相当乙醚半量的蒸馏水洗乙醚层两次，再将乙醚层移人 250mL 的磨口烧瓶中，减压浓缩(旋转蒸发器，35℃)去除乙醚。 6.5 以少量乙醚将浓缩物移人 100mL 磨口烧瓶中，再次减压浓缩去 /