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* * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * 如何进行梯度稀释 连续进行10倍稀释 使用标准曲线检查扩增效率 R2值检测实验的重复性和线性 谢谢! * Rotor-Gene 6000采用创新性的转子式设计的定量遗传扩增检测系统,用于检测、定量和或对样品的基因型进行分析。 * Rotor-Gene 6000具有前瞻性的转子式设计,保证了任何分子实验中最严苛的条件因子,即样品间的最佳的温度均一,从而能够提供高质量的数据。 样品以400rpm持续离心。离会不会造成探针或染料的梯度,不会沉降的DNA,相反,离心可以防止样品凝结,除去气泡。并且,省去了反应前无需离心步骤。 样品在空气仓内加热和降温。通过盖上的镍铬线圈加热。通过顶部气孔将热空气排出,底部风扇吹入冷空气实现降温。 * 有了可自选的6个激发光源和6片检测滤镜,以及固定的光路,Rotor-Gene 6000在多通道的实验中,可保证样品间最小的荧光差异,且无需校正或补偿。 样品由反应仓底部的的发光二极管激发。能量通过薄壁管底部激发染料。发射荧光通过反应仓侧壁的发射滤镜由光电倍增管收集光信号。固定的光路保证了样品激发的均一性,意味着无需被动内掺式染料,与ROX来校正光路。 * 用Rotor-Gene 6000软件开启一个反应非常容易。 * 固定好了转子和压环,盖上仓盖,通过软件设置反应程序。 * 可输入操作者的名字及注释信息。必需输入PCR反应体积。Rotor-Gene 6000的反应体积为20-25 uL。对于大的反应体系,软件会建议您给予较长的变性时间。 如果选中72孔,则有三种样品显示格式可选。当使用数字格式转子时,1,2,3…格式为默认选项。如果样品一个挨一个加在临近的0.1ml管中,则选择1A,1B,1C…格式。如果连续的样品是间隔8管加样的(如用多道排枪加样),则选择A1,A2,A3…格式。大多数用户使用默认格式即可。 * 在这一页中,可修改温度循环和通道设置。点击Edit Profile编辑流程…键进入编辑器以修改循环条件及选择采集通道。完成设置后点击Calibrate校正…键以进入增益值校正窗口。 * 允许您在选中的循环后插入一个循环。流程编辑器 流程编辑器允许您对循环条件及采集通道进行设置。最初的循环流程是建立在您选择的模板上的(设置一个运行)。 流程是以图示显示的。一个循环可以是一个保温、循环、熔解曲线或HRM(如果机器有HRM通道)。流程中每个循环的设置可以通过点击图示中的循环,也可点击列表中的循环名称对温度和时间进行修改。 在……后插入:允许您在选中的循环后插入一个循环。 在……前插入:允许您在选中的循环前插入一个循环。 删除:从流程中删除选中的循环。 保温设置指导Rotor-Gene 6000在设定的温度条件下维持设定的时间。要改变温度,点击Hold Temperature键,输入目的温度或拖动光标即可修改温度。同样,改变保温时间,点击Hold Time,mins和secs即可。 * 根据用户设定的重复数重复用户设定的温度/时间步骤。重复次数的设定用This Cycle Repeats X time(s)这一循环重复X次进行设定。 窗口中显示了每一个循环(在界面右下方的图示中)。循环中的每一次都可进行修改。温度可以通过上下拖动温度指示线进行修改。保温的时间可以通过拖过温度的左右边界进行修改,或者点击左侧温度和时间指示,并进行修改。 各步可以通过右侧的+/-键进行添加或删除。 * 采集:可以在循环中的任一步,任一个通道设置。点击Not Acquisition键。如果在该步已经设置的信号采集,则在该位置会显示采集通道。点击后,会显示采集窗口。要设置采集通道,只需使用键将可用通道列表中的通道添加到采集通道中即可。若要将通道从采集通道列表中删除,只需使用键即可。从采集通道中删除所有通道,占击键。点击Don’t Acquire键同样可以清除所有采集通道。 * 采集:可以在循环中的任一步,任一个通道设置。点击Not Acquisition键。如果在该步已经设置的信号采集,则在该位置会显示采集通道。点击后,会显示采集窗口。要设置采集通道,只需使用键将可用通道列表中的通道添加到采集通道中即可。若要将通道从采集通道列表中删除,只需使用键即可。从采集通道中删除所有通道,占击键。点击Don’t Acquire键同样可以清除所有采集通道。 染料通道选择表:软个提供了该表以方便用户明确应使用的通道。用户可以根据他们将要使用的染料找出相应的通道。这里只列出了最常用的数种染料,并不表示仪器仅局限于这些染料。 * 在这一页中,可修改温度循环和通道设置。点击Edit Profile编辑流程…键进入
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