四唑盐(MTT)比色法检测细胞活力.docVIP

四唑盐(MTT)比色法检测细胞活力 一、实验目的 掌握MTT法检测细胞活力的方法。 二、实验原理 四甲基偶氮唑盐(MTT)为淡黄色粉末，水溶性好，易通过细胞膜而进入细胞。活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性的MTT还原为难溶于水的紫色结晶物甲躜，并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。一般情况下结晶物的生成量与活细胞数成正比。酸性异丙醇、十二烷基硫酸钠(SDS)或二甲亚砜(DMSO)均能溶解细胞中的蓝紫色结晶物，溶液颜色的深浅与所含的甲躜量成正比。用酶标仪在5 7 0nm波长处测定其吸光度OD值(A570nm)，可间接反映活细胞数。MTT法简单快速、准确，广泛用于新药筛选、细胞毒性试验及肿瘤放射敏感性等实验中。它与前述细胞计数法等方法相关性良好，也可用MTT法测定细胞生长曲线。 三、实验器材 仪器 二氧化碳培养箱、酶标仪、9 6孔细胞培养板、可调微量移液器、微孔板振荡器等。 试剂 MTT溶液：MTT溶于pH7.4的0。0 1mol／L PBS液中，磁场搅拌3 0分钟，过滤 除菌，配制成2m9／ml的MTT液，4℃冰箱贮存。二甲亚砜(DMSO)分析纯。细胞培养基。 材料 对数生长期的KB细胞或其他贴壁培养传代细胞。 四、实验步骤 接种细胞 取对数生长期细胞，0.2 5％胰酶消化，加含血清培养