25病毒感染的检查方法与防治原则.pptxVIP

第25章 病毒感染的检查方法与防治原则南方医科大学公共卫生与热带医学学院 微生物学系张其威 PhDEmail：mailto:zhang.qiwei@zhang.qiwei@QQ: 3910035病原学诊断的意义有助于临床治疗（抗生素、干扰素等）为控制病毒学疾病的流行提供实验依据（疫苗等）第一节 病毒感染的检查病毒感染的检查 电镜直接观察 光镜检查包涵体 分离培养 病毒颗粒 病毒抗原（如血凝素） 病毒核酸 （PCR） 病毒酶类：如逆转录酶查病毒检测内容查特异性抗体（如 IgM、IgG）一、标本的采集与送检原则基本与细菌相似，但应注意： 1.标本用“双抗”（2000-10000U）或两性霉素B（2ug/ml)处理 2.低温保存，尽快送检（冰块，CO2） 3.血清学诊断采双份血清（发病初，2-3周）二、病毒的分离与鉴定（一）病毒的分离培养 细胞培养（cell culture） 鸡胚接种（egg inoculation） 动物接种（animal inoculation）二、病毒的分离与鉴定一般程序：动物接种鸡胚培养细胞培养指标阳性指标阴性 病毒鉴定无菌处理标本 盲传2～3代指标阴性病毒阴性（一）病毒的分离培养 1.细胞培养（简述） 单层细胞培养（monolayer cell culture） 分类 悬浮细胞培养（suspended cell culture） 原代细胞（primary cell）细胞种类 二倍体细胞（diploid cell） 传代细胞系（continuous cell line）病毒的细胞培养细胞培养瓶单层细胞1.细胞培养(1)原代和次代细胞培养蛋白酶 剪碎 培养基组织 组织块 分散的单个细胞 单层细胞 (原代细胞)传代培养单层细胞(次代细胞)1.细胞培养(1)原代和次代细胞培养特点：①对多种病毒敏感 ②生长能力有限（20代）, 获取成本高 ③可携带潜伏病毒（EB）1.细胞培养(2)二倍体细胞培养 体外分裂50～100代仍保持二倍体染色体数目，可用于病毒分离和疫苗生产。特点：①对多种病毒敏感 ②不带异种蛋白(人源性) ③不带病毒，无致瘤潜能 ④可传50-100代左右1.细胞培养(3) 传代细胞培养特点：①对多种病毒敏感性高 ②繁殖能力高，传代时间长 ③有致癌危险，不能用于疫苗生产 （由肿瘤细胞或二倍体细胞突变而来）2.鸡胚培养 采用孵化9～14天的鸡胚 绒毛尿囊膜（allantocherion） 痘苗病毒、人类疱疹病毒 尿囊腔（allantoic cavity）接种部位 流感病毒、腮腺炎病毒 羊膜腔（amniotic cavity） 流感病毒的初次分离 卵黄囊（yolk sac） 嗜神经病毒 尿囊腔2、鸡胚培养优点：易管理，不带微生物，成本较低缺点：操作程序复杂3.动物接种 应用：尚无敏感细胞的病毒培养（HCV等） 动物：兔、鼠、黑猩猩、猴等 优点：结果易观察，可建立动物模型 缺点：有饲养条件要求，费用高，动物 体内常带有潜伏病毒，安全性要求高（二）病毒的鉴定 1．病毒增殖鉴定 (1)细胞病变效应（cytopathic effect, CPE ） ①细胞变圆、聚集、坏死、溶解或脱落等（多数病毒）； ②形成多核巨细胞或称融合细胞（麻疹病毒、巨细胞病毒、呼吸道合胞病毒等）； ③在培养细胞中形成包涵体（狂犬病病毒、麻疹病毒等）。 (1)细胞病变效应(cytopathic effect, CPE)①细胞变圆、聚集、坏死、溶解或脱落(1)细胞病变效应(cytopathic effect, CPE)呼吸道合胞病毒感染细胞麻疹病毒感染细胞②形成多核巨细胞或称融合细胞(1)细胞病变效应(cytopathic effect, CPE)③形成包涵体(inclusion body)(2)红细胞吸附（hemadsorption）病毒囊膜表面血凝素(HA)＋红细胞表面HA受体腮腺炎病毒感染细胞(3)干扰现象（interference）风疹病毒＋人胚肾细胞 病毒增殖，CPE(－)埃可病毒＋人胚肾细胞 病毒增殖，CPE(＋)CPE(-)—风疹病毒(+) 埃可病毒(-)CPE(+)—风疹病毒(-) 埃可病毒(+)风疹病毒？埃可病毒（+）＋人胚肾细胞(4)细胞代谢改变 细胞代谢变慢 pH改变 （adenovirus）2.病毒形态学鉴定电子显微镜：设备、操作复杂，应用受限光学显微镜：可见大病毒（痘类病毒）， 对一般病毒检测意义不大3.病毒血清学鉴定 鉴定病毒种、型、亚型 (1)血凝抑制试验（hemagglutination inhibition test）—正粘病毒型与亚型鉴定 病毒＋鸡红细胞＝凝集（血凝试验/血凝效价） 病毒＋特异性抗体＋鸡红细胞＝不凝集 （血凝抑制