HPLC定量分析冬虫夏草的主要核苷类有效成分.docVIP

?58?中药材JournalofChineseMedicinalMaterials　　第31卷第1期2008年1 月 HPLC定量分析冬虫夏草的主要核苷类有效成分 梁洪卉,程　舟,杨晓伶,李　珊,丁祖泉,周铜水,张文驹,陈家宽 (11同济大学生命科学与技术学院,上海200092;21复旦大学生命科学学院生物多样性科学研究所生物多样性与生态工程教育部重点实验室,上海200433) 　　摘要　目的:探讨冬虫夏草主要核苷类成分的定量分析方法。方法:采用微量提取及HPLC2UV分析法。结果:建立了冬虫夏草核苷类物质的微量提取方法,在优化的HPLC2UV色谱条件下,鸟嘌呤、胸腺嘧啶、腺嘌呤、腺苷和虫草素等5种冬虫夏草主要核苷类物质的标准品分离完全。精密度、稳定性和回收率实验表明,用HPLC2UV方法即可定量分析冬虫夏草的核苷类有效成分。用该方法检测到这5种核苷类物质含量在冬虫夏草子座部分与其虫体部分之间以及冬虫夏草居群间存在显著差异。结论:冬虫夏草主要核苷类成分的有效定量分析方法的建立对冬虫夏草的品质评价及质量控制具有重要的现实意义,也为进一步研究影响冬虫夏草品质的因素并建立品质评价体系奠定了基础。 关键词　冬虫夏草;核苷类物质;HPLC2UV;定量分析 中图分类号:R28411　　文献标识码:A　　文章编号:100124454(2008)0120058203 13 2 2 2 　　冬虫夏草(Cordyceps)系麦角菌科虫草属真菌冬虫夏草菌(Cordycepssinensis[Berk1]Sacc1)寄生于鳞翅目蝙蝠蛾科(Hepialidae)〔1〕 效方法,1100HPLC高效液相色谱仪(UV检测 布在我国青海、西藏3000～5100m的高寒草甸区,冬虫 器),色谱级甲醇,分析纯磷酸氢二钠及磷酸二氢 钠,液氮;标准品:鸟嘌呤(G),胸腺嘧啶(T),腺嘌呤(A),腺苷,虫草素;冬虫夏草样品采自青海省兴海县(XH)、西藏丁青县(DQ)、四川省康定县(KD)3个居群,每个居群随机选取三条虫草,每条虫草分 夏草有调节人体免疫系统活性、抗肿瘤活性、调节肾功能、恢复肝功能、抗氧化活性、调节心血管功能等功效 〔2〕 。自发现冬虫夏草所含的虫草素具有抗肿 瘤活性以来,冬虫夏草的核苷类物质如腺嘌呤、鸟嘌呤、胸腺嘧啶、腺苷、虫草素等已成为冬虫夏草研究的焦点 〔2〕 成虫体(W)和子座(FB)两部分用于主要核苷类物质的测定分析。2　方法及结果 211　核苷类物质的微量提取　取各冬虫夏草样品 。在中国药典2005年版中,腺苷被作为冬 〔1〕 虫夏草的质量控制指标。但这些核苷类活性成 分的定量分析容易受到分析方法的限制,对冬虫夏草的有效利用造成一定的影响。现有的冬虫夏草主要核苷类成分的定量分析方法主要采用高效液相色 谱2二极管阵列检测器(HPLC2DAD)、质谱分析 〔328〕(MS)及液质联用(LC2MS)等。其中,HPLC2 约30mg(准确至010001g),液氮研磨,再加入90%甲醇提取液5ml,研磨后转移至回流瓶后称重,回流提取30min,称重并补加90%甲醇提取液至回流前的重量,离心,过滤得到待测样品提取液。212　色谱条件　Agilent1100HPLC,UV检测器, DAD价格较昂贵,质谱更是一般实验室所不具备 的。此外,上述定量分析方法不仅需要较大的样品量(百毫克级),而且不能将各有效活性成分完全分开 〔328〕 波长260nm,C18色谱柱(250mm×416mm,5 μm);进样量10μl,流速016ml/min,温度25℃,运行时间18min。流动相采用[0101MNaH2PO4∶ 〔1〕 0101MNa2HPO4(1∶212)]∶甲醇(17∶3)。运行时 ,如HPLC2DAD方法未能将上述核苷类物质 〔3,5,728〕 全部检测出来开 〔4〕 ,LC2MS虽能检测出上述所有用流动相:甲醇(85∶15)梯度洗脱,理论塔板数应大于2000。在此色谱条件下冬虫夏草的主要核苷类物质均能达到完全分离,且峰形好。鸟嘌呤、胸腺嘧啶、腺嘌呤、腺苷和虫草素等5种冬虫夏草主要核苷类物质的标准品分离完全,见图1。同样,冬虫夏草 核苷类物质,但未能将鸟嘌呤与胸腺嘧啶完全分 。因此,本研究探讨并优化冬虫夏草核苷类有效成分的微量提取和HPLC2UV色谱条件,建立HPLC2UV定量分析冬虫夏草主要核苷类成分的有 基金项目:上海市科委中药现代化专项(03DZ19547) 作者简介:梁洪卉(19722),吉林公主岭市人,在读博士生。3 通讯作者:程舟,Tel:021265985185,Fax:021265981041,E2mail:chemgzhou@tongji1edu1cn。 中药材JournalofChineseMedicinalMaterials