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- 2019-12-13 发布于广西
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第2讲 基因工程和细胞工程
[考纲要求] 1.基因工程的诞生(A)。2.基因工程的原理及技术(含PCR技术)(B)。3.基因工程的应用(B)。4.蛋白质工程(A)。5.植物的组织培养(B)。6.动物的细胞培养与体细胞克隆(A)。7.细胞融合与单克隆抗体(B)。
1.基因工程
(1)基因工程的3种基本工具
①限制性核酸内切酶:识别特定核苷酸序列,并在特定位点上切割DNA分子。
②DNA连接酶:a.E·coli DNA连接酶只能连接黏性末端;b.T4 DNA连接酶能连接黏性末端和平末端。
③载体:需具备的条件包括:a.能在宿主细胞内稳定存在并大量复制;b.有一个至多个限制酶切割位点;c.具有特殊的标记基因,以便对含目的基因的受体细胞进行筛选。
(2)获取目的基因的途径:①从基因文库中获取;②利用PCR技术扩增;③化学方法直接人工合成。
(3)基因表达载体的组成:启动子、目的基因、终止子及标记基因等。
(4)将目的基因导入受体细胞
①植物:体细胞或受精卵——常用农杆菌转化法(双子叶植物和裸子植物)、花粉管通道法、基因枪法(单子叶植物)。
②动物:受精卵——显微注射技术。
③微生物:细菌(常用大肠杆菌)——感受态细胞法(钙离子处理法)。
(5)目的基因的检测与鉴定方法
①检测目的基因是否插入转基因生物的DNA上:DNA分子杂交技术。
②检测目的基因是否转录出mRNA:分子杂交技术。
③检
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