原创力文档- 29
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- 2020-04-10 发布于湖北
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基因表达量实时荧光定量PCR检测步骤
1 材料（试剂和耗材）
1.1 样本（小鼠组织）-2个
1.2 引物（life technology公司合成）
1.3 BestarTMqPCR RT Kit（德国DBI货号：DBI-2220）
1.4 Bestar? SybrGreenqPCRmastermix（德国DBI货号：DBI-2043）
1.5 96孔板（美国life technology）
2 材料（仪器）
2.1 ABI7500荧光定量PCR仪（life technology公司）
2.2 TGL-16M低温冷冻离心机（湘仪）
2.3 SW-CJ-1D单人净化工作台（泸净净化）
2.4 HR40-Ⅱ A2生物安全柜（Haier）
3 实验步骤
3.1 RNA的抽提
RNA 的提取按life technology公司提供的Triozol RNA提取试剂盒的使用说明进行。程序如下：
（1）将组织在液氮中磨碎，每50-100mg组织加入1ml TRIzol；
（2）加入0.2mL氯仿，盖紧离心管管盖，上下颠倒混匀60s（请勿涡漩激烈振
荡），室温静置3min，12,000g，4℃离心 15min，置于冰上；
（3）溶液分为三层，RNA溶解在水相中，小心吸取 500μl水相至另一个新的RNase
free的EP管中；
（4）加入500μl异丙醇，-20度放置1h，12,000g，4℃离
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