荧光定量pcr检测外源基因拷贝数的新方法.docVIP

第３０卷第３期 ２００９年６月暨南大学学报（自然科学版）ＪｏｕｒｎａｌｏｆＪｉｎａｎＶ０１．３０Ｎｏ．３Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ（ＮａｍｒａｌＳｃｉｅｎｃｅ）Ｊ蛆．２００９应用实时荧光定量ＰＣＲ检测外源基因拷贝数的新方法 万艳，李丽玲，陈小佳 （暨南大学生物工程研究所，广东广州５１０６３２） ［摘要】介绍一种采用实时荧光定量ＰＣＲ法鉴定重组细胞株基因组中外源基因拷贝数的方法．首先根据研究 对象建立标准品，以拟检测的外源基因设计特定的引物，得出标准曲线，然后在不同重组细胞株中对外源基因进行 Ｒｅａｌ－ＴｉｍｅＰＣＲ鉴定，根据结果与标准品比对得出实际的拷贝数．结果表明：以转染８ＰＤＧＦＲ理基因的重组ＣＨＯ－ＫＩ 细胞为例，采用该方法，利用标准品制备的标准曲线具有较高的扩增效率和良好的线性关系，并且具有较大的线性 范围（１０１一１０ｊ拷贝）；测得各重组细胞株外源基因拷贝数不同，３次独立实验表明结果一致．与传统杂交技术鉴定 转基因拷贝数相比，该方法具有高效省时、更稳定、高通量和低成本等优点． 【关键词】外源基因；拷贝数；实时定量ＰＣＲ ［中图分类号】Ｒ７３５．７【文献标识码】Ａ【文章编号】１０００—９９６５（２００９）０３—０３１０—０４ Ａｎｅｗｍｅｔｈｏｄｔｏｔｅｔｅｒｍｉｎｅｔｈｅｃｏｐｙｎｕｍｂｅｒｓｏｆｅｘｏｇｅｎｏｕｓ ｇｅｎｅｂｙａｂｓｏｌｕｔｅｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅＲｅａｌ－