pnh阵发性睡眠性血红蛋白尿的流式细胞术检测解读.pptxVIP

阵发性睡眠性血红蛋白尿的流式细胞术检测 李智伟PNH(paroxysmal nocturnal hemoglobinuria) 是一种罕见的获得性克隆造血干细胞疾病。但近年来有增多趋势。我国北方多于南方。半数以上发生在20-40岁青壮年。男性多于女性，与遗传及种族无关。本病起病隐袭缓慢，呈慢性过程，以贫血、出血为首发症状者较多，以血红蛋白尿起病者较少。血红蛋白尿 睡眠有关，早晨较重，下午较轻 尿液外观为酱油或红葡萄酒样;伴乏力、胸骨后及腰腹疼痛、发热等 原因因为补体作用最适宜的pH是6.8～7.O，而睡眠时呼吸中枢敏感性降低，酸性代谢产物积聚 研究历史 Strubing第一次报道PNH Ham 和Dingle 证明了PNH 患者的红细胞在血清酸化条件下，易发生溶血，这就是现在普遍使用的Ham 实验1983年证实PNH患者GPI合成异常1993年pig-a基因突变流式细胞术 原理：X染色体上PIG-A（造血干细胞经获得性体细胞基因）突变导致糖化肌醇磷脂(GPI)锚合成障碍 导致由GPI锚接在细胞膜上的一组膜蛋白丢失，包括CD16、CD55、CD59等GPI锚连接蛋白 补体调接蛋白 衰变加速因子(DAF或CD55)、膜攻击复合物抑制因子(MACIF或MIRL或CD59)、补体C8结合蛋白(HRF或C8bp)、膜辅助蛋白(MCP)。?粘附分子 淋巴细胞功能相关抗原-3(LFA-3或CD58)、 Blast-1/ CD48、CD67、CD66。GPI锚连接蛋白 酶类 红细胞乙酰胆碱脂酶 ( AchE )、中性粒细胞碱性磷酶酸酶 ( NAP )、5’外核酸酶 ( CD 73 )。受体类 中性粒细胞III型Fc受体 ( FcRIIIb 或CD16 )、单核细胞分化抗原 ( CD14 )、尿激酶型纤溶酶原激活物受体 ( u-PAR )。血型抗原 CD55 携带的Comer抗原、AchE携带的 Yt抗原。 1型细胞 CD59完全阳性补体激活途径Ag-Ab经典途径 C1 C1C2,C4 C4b2b (C3转化酶） C3 C3b P （备解素） PC3bBb C3bB (C5转化酶）C4b2b3b或PC3bBb C8 C9 C6C7C5 C5b C5b678 C5b-9 (MAC)CD55替代途径CD59分析1.红系及粒系FSC/SSC设门 报告标本中CD55、CD59阴性比例做20~30份正常人血样划定阳性区（Ⅰ区）范围同型阴性对照界定Ⅲ区范围，中间的区域即为Ⅱ区。根据CD59可以将PNH细胞分为3型1型细胞 CD59完全阳性 正常细胞2型细胞 CD59部分阳性 补体中度敏感细胞3型细胞 CD59完全阴性 补体敏感细胞意义CD55和CD59同时部分或完全缺失是PNH的典型表现，单GPI缺失不能确诊。CD59重要性大于CD55单CD55缺乏时并不因此改变红细胞对补体的敏感性而造成溶血CD59的缺失会增加补体的敏感性临床上以CD59缺失作为诊断标准是一个趋势。解决了一切以补体溶血为基础的实验诊断方法在诊断PNH的不确定性其它细胞的PNH检测PNH患者的红细胞、粒细胞、单核细胞及淋巴细胞上GPI锚连膜蛋白部分或全部丧失。粒细胞单核细胞淋巴细胞红细胞骨髓PNH克隆出现比外周血早，网织红细胞略早于红细胞其它细胞的PNH检测应用FSC/SSC设门分析时会有许多脱颗粒的中性粒细胞，这时只使用物理特征无法准确设定粒细胞门了，这时必须使用系列标志/SSC设门:CD15，CD33 。 CD64设门，分析单核CD14,CD55,CD59，PNH病人检测GPI缺乏的血小板不容易分辨不能只根据淋巴细胞上GPI相关蛋白的表达来诊断。 与其他实验比较 1.酸溶血试验(Ham试验) 患者红细胞与含5%盐酸的正常同型血清混合，pH6.4，37℃孵育2小时，溶血明显。本试验特异性高，敏感性差。2.蛇毒因子溶血试验蛇毒因子能通过补体交替途径，使补体敏感的红细胞发生溶血。本试验特异性强，敏感性优于酸溶血试验。3.热溶血试验和蔗糖溶血试验 因特异性差，常作为筛选方法。具有PNH克隆的血液病 检测粒细胞GPI 锚连蛋白表达 病种 检测例数 缺失例数( % ) AA 115 25 ( 22 % ) MDS 39