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荧光定量PCR技术在 临床检测中的应用;PCR与基因诊断技术;;基本原理;原理 第一步 – 加热变性;第二步 – 引物与靶序列退火;第三步 - 引物延伸;第1个 PCR 循环完成后 – 得到两个拷贝的靶序列;30次循环后靶序列扩增的数量;荧光PCR的原理;PCR技术的特点;Ct值的意义;感染性疾病的诊断 母婴传播的控制与观察 遗传疾病的诊断 肿瘤的诊断 法医学鉴定;早期诊断 病情评估和预后判断 抗病毒药物疗效的观察、指导 新药验证;一 感染性疾病 　 1. 病原体含量与病情之间的关系 　 2. 病原体含量与用药之间的关系 　 3. 药物及疗法的研究与开发 　 4. 新的病原体分子诊断标准 　 5. 新的愈后指标 　 6. 传染病发病的监控、预测与预防 ;临床应用;三 遗传病 1. 等位基因检测 2. 多基因遗传病的突变检测 3. 基因表达异常所致遗传病检测 ; 1.亲子鉴定 2.法医物证 3.PCR-RFLP技术的法医学应用 4.罪犯鉴定 ;免疫学诊断主要是抗原抗体反应，应用于临床通常在体内产生抗体以后，而许多病原体的免疫学检测存在较长的“窗口期”，不利于对疾病的早期诊断；PCR方法直接检测病原体的DNA/RNA，能大大缩短“窗口期”，其高灵敏度的检测显然也有利于疾病的早期诊断。;荧光定量PCR在病原体检测中的应用;　肝炎病毒定量检测 HBV HCV;（一） 乙型肝炎病毒结构及特点;HBV; 3. 血清学指标(－)不能排除HBV感染。 ;HBV;HBV;HBV DNA检测的临床意义;病毒特点： 1. 单正链RNA病毒 2. E1和E2区基因高度变异性;(二)　HCV-RNA定量检测的临床意义;HCV;二　常见性传播疾病病原体;NGH;CT;UU;1. 非培养或形态学检查的诊断技术，快速、特异、敏感。 2. 对无症状或症状轻者，可以早期确诊。 3. 对NGH、CT、UU 等混合感染者，诊断和鉴别诊断。 4. 指导用药、考核疗效。 ;NGH/CT/UU;;人乳头瘤病毒感染与致病;人乳头瘤病毒感染与致病;看看这些英年早逝的艺人，她们死于宫颈癌……宫颈癌的知晓率在不断提高。;HPV;1. 对典型病例可以明确诊断。 2. 对临床表现和组织病理改变都不典型的病例同样可以做出诊断。 3. 对亚临床和隐性HPV感染做出诊断。 4. 基因分型。 5. 考核疗效与预后。 6. 病毒载量与患癌症风险。 ;HPV;三　结核杆菌与呼吸道病原体检测;结核杆菌流行现状（1）;结核杆菌流行现状（2）;结核杆菌引起的感染;常规结核病实验室诊断方法及不足;荧光定量PCR检测TB-DNA的意义;3. 荧光定量PCR检出结核杆菌阳性率显著高于痰涂片抗酸染色和改良罗氏培养法。 4. TB-DNA浓度可用于判断疗效： 痰标本中结核杆菌的数量呈逐渐下降趋势 ，TB-DNA拷贝数下降。根据病原体DNA浓度，对药物治疗及疗效观察提供参考依据 ;四　TORCH感染特点与检测;TORCH感染特点;(一) 弓形虫感染与致病;人群自然感染率达到60-90%，多为隐性感染 免疫功能低下(怀孕、多次输血、器官移植、AIDS)发生显性感染 可发生垂直传播，是宫内感染和胎儿畸形的主要病毒之一 围生期感染 血、尿、乳汁、精液、分泌物中都可检出病毒 ;风疹是一种世界性的病毒传染病， 是造成畸胎及先天性疾病的病毒之一 出疹前1周至出疹后5天均有传染性 人是风疹病毒的唯一宿主 风疹感染后可获得持久的免疫力，临床显性再感染并不多见。 ;先天性风疹感染往往发生在母体初次感染之时，可致先天性风疹综合症(CRS) 三联症：白内障、耳聋、心脏病。 妊娠时体内皮质类固醇激素的增加以及细胞免疫功能的减弱，这种对正常人无害的再感染有可能造成病毒蔓延以至影响胎儿。 ;HSV原发感染多为隐性，大多无临床症状或呈亚临床表现 HSV-1主要引起口唇疱疹，疱疹性结膜炎、脑炎，皮肤性疱疹 HSV-2主要引起原发性生殖器疱疹 (80%) 。 HSV感染后大多数个体不能彻底消灭病毒，也不能阻止复发，病毒以潜伏状态长期存在宿主体内。 ;妊娠期妇女因HSV-1被激活，可通过胎盘感染胎儿，引起胎儿畸形、智力低下、流产等。 围产期感染可引发新生儿疱疹，死亡率高达50%以上。 HSV常与HIV-1同时感染，并能促进病情发展，引起严重的局部和播散性感染。目前认为HSV是一种调节因素，能激活HIV复制 与宫颈癌关系密切。 ;常规TORCH检测方法与不足; 荧光探针检测TORCH的优势;TORCH;检验结果解析;举例;;HBV—DNA的变化;例如1;例如2;检验报告单结果读取;Thank