分子克隆工具酶13级.pptxVIP

第三章 分子克隆工具酶第一节 限制性内切酶第二节 甲基化酶第三节 DNA聚合酶第四节 其他分子克隆工具酶第一节 限制性内切酶一、限制与修饰二、限制酶识别的序列三、限制酶产生的末端四、线性DNA末端对酶切的影响五、酶切反应条件六、酶切位点的引入一、限制与修饰 细菌的限制与修饰系统(R/M系统)由限制酶（限制性核酸内切酶）和修饰酶（甲基化酶）组成。R / M系统的作用：保护自身的DNA不受切割；破坏外源DNA使之迅速降解。 λ噬菌体在不同宿主中的转染频率。（见p17）实验说明：K菌株和B菌株中存在一种限制作 用，可排除外来的DNA.限制酶降解外源DNA，维护宿主遗传稳定的保护机制识别自身遗传物质和外来遗传物质A→N6-MeAC→5-MeC限制酶的发现 美国约翰.霍布金斯大学的H.Smith于1970年偶然发现，流感嗜血杆菌(Haemophilus influenzae)能迅速降解外源的噬菌体DNA，其细胞提取液可降解E.coli DNA，但不能降解自身DNA，从而找到Hind II限制性内切酶。限制性核酸内切酶(restriction endonuclease)是一类能识别双链DNA中特殊核苷酸序列，并使每条链的一个磷酸二酯键断开的脱氧核糖核酸内切酶。限制酶的生物学功能用来保护宿主不受外来DNA的感染，可降解外来的DNA，