自动检测工作技术应用液相色谱基础知识.pptVIP

检测器：电化学合光学两类检测器。 电化学检测器有电导检测器（测量两电极间离子型溶质的电导）、安培检测器（两电极间时间一电位，仅用于具有电活性的组分测定）、脉冲和积分安培检测器（两电极间施加三个脉冲电位）。 液相色谱—离子色谱 Conductivity Detector Sensitivities for compounds such as phenol, catecholamines,nitrosamines, and organic acids are in the picomole (nanogram) The mobile phase must be made electrically conductive, usually by the addition of a suitable salt 光学检测器有：紫外检测器和荧光检测器，可以用直接法和柱后衍生法。 数据系统：记录仪、积分仪、色谱工作站。 液相色谱—离子色谱 反相色谱是指流动相的极性大于固定相的分离体系，其分离机理主要基于溶质与固定相疏水作用的差别 填料： 基质：硅胶 配基： C18, C8, C4, Phenyl Reversed Phase Chromatography反相色谱 硅 胶 硅 胶 Reversed Phase Chromatography反相色谱 柱的选择：根据被分离目标产物的疏水性及分子大小选择合适的色谱柱。C18稳定性高，有效孔径小，对分离蛋白容易产生不可逆吸附。 影响因素：流动相的组成，溶液的pH以及温度。 正相色谱-流动相的极性小于固定相的分离体系；机理-被分离化合物的极性基团与固定相的极性基团相互作用；流动相-非极性的有机溶剂加入极性的有机溶剂；分离-异构体，易水解，在极性溶剂中溶解度小的物质。 反相色谱-流动相的极性大于固定相的分离体系；机理-被分离物与固定相的疏水相互作用力的差别；流动相-极性的有机溶剂或水；分离-范围最广。 RPC NPC Reversed Phase Chromatography反相色谱 液相色谱—紫外可见检测器 可变波长紫外吸收检测器：复合光光源（氘灯190-600nm）——单色器（光栅）——样品——检测器（光电二极管）。 UV/Vis --variable wavelength detector The UV/Vis source usually comes from a monochromator so the wavelength can be selected, or scanned. Absorbance increases as eluate passes through the cell. If wavelength scanning is desired, the flow is stopped long enough for the scan to take place. 液相色谱—紫外可见检测器 二极管阵列检测器：复合光（氘灯或卤钨灯190-800nm）——样品——单色器——阵列的检测器（光电二极管）。 UV/Vis --PhotoDiode Array Detector 液相色谱—紫外检测器 溶剂 最低波长极限/nm 溶剂 最低波长极限/nm 溶剂 最低波长极限/nm 十二烷 200 四氢呋喃 225 四氯乙烯 290（280） 正丙醚 200 1,4-二氧六环 225 二甲苯 295 十氢化萘 200 1,2-二氯乙烷 225 苯甲腈 300 正戊烷 205 1,2-二氯乙烯 230 氯苯 300 正丙醇 205 1,2-二氯丙烷 230 苯甲醚 300 乙醚 210（215） 二氯甲烷 235（232） 苯乙醚 300 乙酯 210 1,1-二氯乙烷 235 吡啶 305 己烷 210 氯仿 245 丙酮 330 庚烷 210（195） 丁酸甲酯 250 甲乙酮 330 液相色谱—紫外检测器 正辛烷 210 乙酸正丁酯 254 溴仿 335 异辛烷 210 甲酸甲酯 260 溴乙烷 350 甲基环己烷 210 乙酸甲酯 260 异溴丙烷 350 正丁醚 210 乙酸乙酯 260 正溴丁烷 350 环己烷 210（200） 乙酸正丙酯 260 碘甲烷 350 正丁醇 210 丙酸甲酯 260 二硫化碳 380 乙醇 210（205） 四氯化碳 265 硝基甲烷 380 水 210（180） N,N-二甲基甲酰胺 270 硝基乙烷 380 异丙醇 215（205 苯 280 2-硝基丙烷 380 甲醇 215（205） 甲苯 285 ? ? 荧光检测器：样品中物质分子能在特定波长的光激发后跃迁到高能级状态，在返回到基态的过程中，会