实验五 一些剂对四膜虫影响的观察.pptVIP

实验五 一些试剂对四膜虫影响的观察 一、实验目的 1、了解生存环境对生命的重要意义。 2、比较各种因素对四膜虫细胞的影响。 二、实验原理 每种生物对环境的酸碱度都有一定的影响，水生生物（包括四膜虫）和培养的组织细胞更是如此。酸碱度超过一定的限度，对细胞的生存不利，甚至会将其杀死！ 深海海水的酸碱度约为pH8左右。大面积的淡水水域酸碱度也较稳定，约在pH6～9之间。海洋和湖泊等水域有较强的调节pH的能力。这是由于水域中存在着H2CO3和碳酸盐的缓冲系统。即使局部地区发生了pH的变化，在一定范围内经过一定时间也能通过这一缓冲系统而恢复正常。但是如果环境污染(酸雨、废酸排放)超过了水域的调节能力，水域的pH就要发生变化，生物的生存和发育就要受到影响。酸碱度的改变对生物的生长生殖和活动都能发生影响。例如，绿草履虫(Paramecium barsaria)，在酸性的培养液中(pH6.0～6.3)，体长可达120μm，在碱性培养液中(pH7.6～8.0)，体长只有86μm。海胆卵在pH6.2的水中不能受精，pH低于4.6时死亡。各种微生物都有其最适酸碱度。酵母和霉菌适宜在微酸性环境中。也有少数可以在强酸或强碱性环境中生存。 氧化剂可使蛋白质变性，破坏生物膜结构，在浓度较高时能迅速杀死细胞。常用的消毒剂如次氯酸钠、双氧水都是强氧化剂。 强氧化剂的杀菌作用： 强氧化剂容易同细菌的细胞壁中的脂蛋白或细胞膜中的磷脂质、蛋白质发生化学反应，从而使细菌的细胞壁和细胞膜受到破坏（即所谓的溶菌作用），细胞膜的通透性增加，且氧化剂迅速扩散进入细胞内，氧化了细胞内酶或RNA、DNA，从而致死菌原体。 巯基乙醇是常用的还原剂，微量巯基乙醇可防止某些生物活性物质的活性基团及酶的活性中心受到破坏。 巯基试剂在生化反应中有两个用途，一是防止蛋白质或酶等分子中的SH-基氧化成S-S，二是某些酶反应中维持体系的还原环境。经常应用的巯基试剂有二硫丁醇类化合物（如二硫苏糖醇DTT、二硫赤酰糖醇DTE）和2-巯基乙醇，谷胱甘肽也经常应用。 巯基乙醇有毒！对环境有危害，对水体可造成污染 。 去垢剂是一些具有亲水的极性基团和疏水的非极性基团的长链分子。非离子型去垢剂如TritonX-100可与脂双层形成混合微团，它们主要与蛋白质疏水部位相互作用，一般不会引起蛋白质变性。而离子型去垢剂与蛋白结合后可改变蛋白质结构，使之变性，尤其是加热后可使蛋白质解离为单体，如十二烷基磺酸钠（SDS）等。 去垢剂能破坏细胞膜结构，造成细胞损伤、功能丧失，甚至引起死亡。非离子型去垢剂通过溶解膜上的脂蛋白和磷脂类化合物等，使细胞膜结构改变。 4、高渗溶液 细胞膜具有对物质选择透过的生理功能。脂溶性越高通透性越大，水溶性越高通透性越小；非极性分子比极性容易透过，小分子比大分子容易透过。水分子可通过水通道进出细胞膜；非极性的小分子如O2、CO2、N2可以很快透过脂双层，不带电荷的极性小分子，如尿素、甘油等也可以透过人工脂双层，尽管速度较慢，分子量略大一点的葡萄糖、蔗糖则很难透过，而膜对带电荷的物质如：H+、Na+、K+、Cl—、HCO3—是高度不通透的。 四膜虫为淡水性原生生物，有伸缩泡来调节渗透平衡，耐低渗，但高渗对其有影响！可注意观察在不同浓度蔗糖和NaCl溶液中细胞发生的变化！ 5、有毒物质 6、其他物质 二、试剂和器材 材料： 1、四膜虫培养液 一种单细胞原生动物，主要产自淡水，一般呈倒卵形或梨形，具有两个细胞核。可在10倍镜下轻松地观察其细胞形态及运动等方面的变化。 2、各种试剂 1mol/L NaOH；1mol/L HCl；1%甲醛；1%Triton X-100；1% SDS；1%次氯酸钠；1%巯基乙醇；1% DMSO；0.25mol/L 蔗糖；0.15mol/L NaCl；蒸馏水。 器材： 载玻片、盖玻片、显微镜、牙签 试剂： 本实验涉及试剂较多，且大多为无色透明液体。实验时请注意小离心管表面的标签，以免搞错试剂！并请大家用记号笔分别在离心管闭上做好记号！ 三、实验操作 3、取两片干净载玻片，左侧标记为A1，右侧标记为A0.1；另外取两片干净载玻片，左侧标记为A0.01，右侧标记为A0.001。 4、用同一枪头，依次从浓度最低的A0.001开始，分别吸取50 μl液体，滴加在载玻片上已标记出的相应位置上，不要涂开！ 5、用装有四膜虫培养液的小塑料瓶从浓度最低的A0.001开始，一次在每一50μl的液滴上滴加一滴四膜虫培养液（约20~30μl），马上用