《质粒DNA的提取与鉴定》-公开课件.pptVIP

5’ G-A-A-T-T-C 3’ 3’ C-T-T-A-A-G 5’ G C-T-T-A-A 5’ 5’ A-A-T-T-C G EcoRI ★5’端粘性末端 在识别顺序的双侧末端切割DNA双链，于对称轴的5’末端切割。 5’ A-A-G-C-T-T 3’ 3’ T-T-C-G-A-A 5’ A T-T-C-G-A 5’ 5’ A-G-C-T-T A HindIII 限制性内切酶 双酶切限制酶的选择非常重要，尽量选择粘端酶切和那些酶切效率高的限制酶，提前看好各公司的双切酶所用公用的BUFFER 如果有一种buffer能同时使2种酶的活力都超过70%的话，就可以用这种buffer作为反应buffer； 如果两种酶厂家不同无法查时可比较其buffer成份，相似的话可以考虑各取一半中和； 限制性内切酶 Buffer的选择查阅内切酶供应商在目录后的附录中提供的各种酶在不同buffer中的活力表 酶量的选择任何时候2种酶的总量不能超过反应体系的1/10体积，而且最大反应体系最好不要小于20 ul。 以TAKARA的为例，其对1单位酶的定义如下：在50 μl 反应液中，30℃温度下反应1小时，将1 μg 的λDNA完全分解的酶量定义为1个活