CN108159078A一种细胞生长因子冻干粉、制备方法及应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 CN 108159078 A (43)申请公布日 2018.06.15 (21)申请号 201810088682.4 A61P 17/00(2006.01) C12N 5/0775(2010.01) (22)申请日 2018.01.26 (71)申请人 深圳市新一仑生物科技有限公司 地址 518000 广东省深圳市盐田区沙头角 街道盐田国际创意港12栋2G1 (72)发明人 杨前　刁波　张宜　袁紫林　陈力　 王刚　王丽萍　 (74)专利代理机构 武汉今天智汇专利代理事务 所(普通合伙) 42228 代理人 邓寅杰 (51)Int.Cl. A61K 35/28(2015.01) A61K 9/19(2006.01) A61K 47/42(2017.01) A61P 17/18(2006.01) 权利要求书1页 说明书6页 附图2页 (54)发明名称 一种细胞生长因子冻干粉、制备方法及应用 (57)摘要 本发明提供一种细胞生长因子冻干粉、制备 方法及应用，细胞生长因子冻干粉是由脐带间充 质干细胞传代培养的细胞培养上清液进行冰冻 后制备而成，并加入人血白蛋白作为保护剂。制 备方法包括以下步骤：A:将脐带间充质干细胞进 行分离;B:将脐带间充质干细胞加入培养基中进 行传代培养;C:收集步骤B中脐带间充质干细胞 培养上清液，加入甘露醇与人血白蛋白后先将细 胞培养上清液抽至离心管中放置低温冰箱或者 液氮罐中冻存至固态状，使培养基完全冰冻结 实，将固态状的冰冻培养基放置冻存瓶中，然后 上机冷冻干燥12-24h制成冻干粉，并冷藏保存。 A 加入人血白蛋白作为保护剂，不易引起过敏及其 8 他排斥反应，更易吸收，对皮肤有抗氧化的功效， 7 0 9 进一步延缓皮肤衰老。 5 1 8 0 1 N C CN 108159078 A 权　利　要　求　书 1/1页 1.一种细胞生长因子冻干粉，其特征在于，所述细胞生长因子冻干粉是由脐带间充质 干细胞传代培养的细胞培养上清液进行冰冻后制备而成，并加入人血白蛋白作为保护剂。 2.一种细胞生长因子冻干粉制备方法，其特征在于，其包括以下步骤： A: 将脐带间充质干细胞进行分离; B: 将脐带间充质干细胞加入培养基中进行传代培养; C: 收集步骤B中脐带间充质干细胞培养上清液，加入甘露醇与人血白蛋白后，先将细 胞培养上清液抽至离心管中放置低温冰箱或者液氮罐中冻存至固态状，使培养基完全冰冻 结实，将固态状的冰冻培养基放置冻存瓶中，然后上机冷冻干燥12-24h制成冻干粉，并冷藏 保存。 3.根据权利2所述一种细胞生长因子冻干粉制备方法，其特征在于，所述步骤A包括以 下步骤: A1：分离新鲜脐带血管周围的沃顿胶，剪碎； A2：放入Ⅰ型胶原酶中，加入双抗和两性霉素B，混合均匀后置于培养箱中37℃过夜，取 出后加入胰酶，再次置于培养箱中37℃，消化30min； A3：消化后,用生理盐水稀释4 6倍后3000 rpm离心15 20min；~ ~ A4：离心后弃上清液，加入培养基混悬后转入培养皿中，每皿加添加剂，双抗和两性霉 素B, 置培养箱中培养,根据培养状态进行换液，待细胞长满后传代培养。 4.根据权利2