EB病毒早期抗体检测（ELISA）标准操作程序SOP文件.docVIP

ABCD医院 免疫实验室 文件编号： ABCD-SOP-01-29 EB病毒早期抗体检测( ELISA ) 版序：ABCD 页码：第1 页，共2 页 [原理] 本试剂盒用基因工程表达混合抗原包被微孔板。待测血清中抗—EBV 抗体现微孔板抗原反应，再与酶标抗人IgG给合，形成抗原—抗体—酶标抗体复合物，加入底物显色系统，通过显色的深浅来判定EBV抗体的存在和含量。 [试剂盒组成] 1、EBV抗原包被板 6、底物液A 2、阴性对照血清 7、底物液B 3、阳性对照血清 8、终止液 4、酶标给合物 9、洗涤液 5、样品稀释液 （用蒸馏水500ml稀释后使用） [试剂厂家] 郑州博赛生物工程有限责任公司 [试剂的稳定性与贮存] 试剂自生产日起避光贮存于2-8℃ [标本的收集与处理] 标本为无溶血血清。 [操作步骤] 加样：设空白对照1孔（用样品稀释液），阴、阳性对照各2孔。分别加阴、阳性对照血清各2滴（100ul）和100ul样品稀释液，待测样本10ul于相应孔内。用封膜覆盖反应板，置37℃30分钟。 洗涤：扣去孔内液体，用洗涤液注满各孔，静置20秒，扣去洗涤液，重复6次后在吸水纸上拍干。 3、加酶：除空白对照孔外，每孔加2滴酶标记物，轻轻振荡封板后，置37℃水浴20分钟。 4、洗涤：扣去孔内液体，用洗涤液注满各孔，静置20秒，扣去洗涤液，重复6次后在吸水纸上拍干。 5、显色：每孔加底物液A 、B 各1滴，轻轻振荡封板后，置37℃水浴10分钟。 [结果判定] 1、目测：在白色背景下观察各孔颜色，呈明显兰色判为阳性，无色或极淡兰色判为阴性。 ABCD医院 免疫实验室 文件编号： ABCD-SOP-01-29 EB病毒早期抗体检测( ELISA ) 版序：ABCD 页码：第2 页，共2 页 2、酶标仪检测（选波长450nm）：每孔加终止液2滴后，用空白孔校零，测定各孔OD值。 临界值（C.O.）=2.1×阴性对照平均OD值； 样本OD值S/C.O.≥1者为阳性。（即S≥临界值） 样本OD值S/C.O.＜1者为阴性。（即S＜临界值） 注：阴性对照孔OD值小于0.05时，按0.05计算；大于0.05时，按实际值计算。 [质量控制] 每批检测同步进行标准和质控品测定，绘制室内质控图 。其它按室内质量控制管理规定进行。 [参考范围] 酶联免疫吸附试验（ELISA）：阴性 [临床意义] EBV感染主要通过唾液传播，也可借输血传染。主要引起传染性单核细胞增多症，非洲儿童恶性淋巴瘤，鼻咽癌。 [注意事项] 1、不同批号的试剂不可混用。 2、试剂用前先平衡至室温。含血球的标本易出现假阳性，应避免使用。 3、未用完的板条应及时封存于易封袋中。 4、滴加试剂前，应将滴瓶翻转数次混匀。滴加时瓶身应保持垂直。 5、若浓缩洗涤液出现结晶，可于37℃ 6、本试剂盒应视为有传染性物质，请按传染病实验室规程操作。 7、检测样品应新鲜，避免溶血。4℃放置最多三天，否则冻存，以免抗体效价降低。 8、严格按说明书操作，每次操作应紧凑。终止后，须在10分钟内测试或判断结果，以免颜色发生变化。