基因组文库的构建.pptxVIP

第三章 基因文库的构建和筛选 ;第一节 基因文库的构建;; ?噬菌体克隆文库的构建。 (a)将外源基因组的DNA片段克隆到?噬菌体载体中来构建基因组文库。菌苔上的噬菌斑中含有大量不同的重组噬菌体，每一个噬菌斑来自单个感染噬菌体的一个克隆。各个克隆带有不同的细胞DNA片段。 (b) 噬菌斑被转移到尼龙膜上，而噬菌体的蛋白被溶解，和重组体DNA分开，DNA吸附到膜上。再将此膜与带有放射性同位素标记的探针进行分子杂交，可以杂交的便是目的基因。 带有此DNA的克隆可通过放射自显影而显现出来。这样阳性克隆可从培养基中分离出来，再转接到新鲜的宿主菌中，使目的因得到扩增。 ;; 用?噬菌体置换型载体构建基因文库。 用限制性酶消解?噬菌体载体，切除了中央的片段，再用相同的限制性酶剪切外源基因组DNA，将约15kb的酶切片段随机地和?噬菌体载体的两臂连接，形成线性的重组的串联体。 用体外包装系统将串联体中单个的基因组DNA分别包装入不同噬菌体头部，形成不同的重组噬菌体颗粒。 用重组噬菌体感染适合的宿主菌，产生噬菌斑。每一个噬菌斑来自单个感染噬菌体的一个克隆。 各个克隆带有不同的细胞DNA片段。 ;; 一个典型的基因组文库含带有重叠基因片段的多拷贝克隆。 (a)用从原有的克隆DNA片段制备的放射性探针能从典型的基因组文库中分离各种基因