实验二醋酸纤维树脂.pptxVIP

[实验目的];[实验原理];实验以醋酸纤维素为电泳支持物，分离血清蛋白。 血清中含有清蛋白、α-球蛋白、β-球蛋白、γ-球蛋白和各种脂蛋白等。各种蛋白质由于氨基酸组分、立体构象、分子量、等电点及形状不同，在电场中迁移速度不同。分子量小、等电点低，在相同碱性pH缓冲体系中，带负电荷多的蛋白质颗粒在电场中迁移速度快。 如以醋酸纤维薄膜为支持物，正常人血清在pH8.6的缓冲体系中电泳1 h左右，染色后可显示5条区带。清蛋白泳动最快，其余依次为α1-、α2-、β-、γ-球蛋白。这些区带经洗脱后可用分光光度法定量，也可直接进行光吸收扫描，自动绘出区带吸收峰及相对百分比，临床医学常用它们间相对百分比的改变或异常区带的出现作为临床鉴别诊断的依据。;器材： ① 醋酸纤维薄膜（2×8cm） ② 常压电泳仪 ③ 点样器 ④ 培养皿（染色及漂洗用） ⑤ 粗滤纸 ⑥ 玻璃板 ⑦ 竹镊 试剂： ① 巴比妥缓冲液（pH=8.6）： 巴比妥2.76克，巴比妥纳15.45克，加水至1000ml。 ② 染色液：（可重复使用）。 含氨基黑10B 0.5克，甲醇50 ml，冰醋酸10ml，加蒸馏水至水100ml。 ③ 漂洗液： 含甲醇或乙醇45ml，冰醋酸5ml，水50ml。 ④ 透明液：含无水乙醇7份，冰醋酸3份。 ⑤