基因文库与克隆分析应用新.pptxVIP

第九章 基因文库与克隆分析应用;克隆（重组技术）的基本步骤: ?目的基因的获取：供体生物基因或称外源基因的获取与纯化 ?载体的选择 ?限制性酶切：目的基因与载体形成粘性末端 ?纯化 ?连接：目的基因连接到载体中 ?转化：将这个重组DNA分子转入受体细胞 ?筛选和鉴定：对吸收了重组DNA的受体细胞进行筛选和鉴定 ?基因表达：进行培养，检测外源基因表达产物;复习;质粒的生物学基本特性： 自主复制性：携带有自己的复制起始区（ori），它能独立于宿主细胞的染色体DNA而自主复制。 不相容性：不同质粒如果被导入同一细胞中，会彼此竞争，拷贝数多的复制更快，结果在细菌繁殖几代之后，子细胞中绝大多数都含有占优势的质粒，因而这两种质粒中只能有一种长期稳定地留在细胞中。 稳定性：质粒在宿主细胞中保持着一定的考贝数。 寄生性：质粒只能在宿主的细胞内复制。 表现型：不同的质粒有不同的表型，如对抗生素的抗性等。;（一）原核生物基因文库的构建 （二）真核生物目的基因的获得;二、目的基因的获得;二、目的基因的获得;c、蓝-白斑筛选 ? 如pUC质粒含LacZ基因（编码β半乳糖苷酶），该酶能分解生色底物X-gal(5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷）产生蓝色，从而使菌株变蓝。当外源DNA插入后，LacZ基因不能表达，菌株呈白色，称之为蓝-白斑筛选。;二、目的基因的获得;（二）真核生物目的基因的获得 1、c