农杆菌转化法dna分子杂交或抗原.pptxVIP

选修3第一讲高考成功方案 第1步高考成功方案 第2步高考成功方案 第3步一、DNA重组技术的基本工具1．DNA重组技术的“分子手术刀”(1)“分子手术刀”即 。(2)来源：主要从 中分离。(3)功能：识别 、切割 。(4)结果：产生 或 。限制性核酸内切酶原核生物磷酸二酯键特定核苷酸序列黏性末端平末端2．E·coli DNA连接酶与T4DNA连接酶(1)化学本质： 。(2)功能上的相同点：均可催化形成 。(3)功能不同点： 可“缝合”黏性末端和 平末端， 则只能缝合“黏性末 端”，不能缝合平末端。均为蛋白质磷酸二酯键T4DNA连接酶E·coli DNA连接酶3．基因工程常用的载体基因工程常用载体是 ，其化学本质是 。二、基因工程的基本操作程序1．获取目的基因的手段①从 中获取；②利用PCR技术扩增目的基因；③通过DNA合成仪用化学方法直接合成。质粒一种双链环状DNA分子基因文库2．基因工程的核心(1) 是基因工程的第二步，也是基因工程的核心。(2)基因表达载体的组成：除目的基因外，还必须有 、 和 等。①启动子：是一段有特殊结构的 ，位于 ，是 的部位。②标记基因的作用：鉴定受体细胞中是否含有 ，从而 。基因表达载体的构建启动子标记基因终止子DNA片段RNA聚合酶识别和结合基因首端目的基因将含目的基因的细胞筛选出来3．将目的基因导入受体细胞的方法(1)植物最常用： 法，其次为 法、 法。(2)动物：最常用 法，其受体细胞通常为 。(3)细菌： 法，需用 处理细胞。农杆菌转化基因枪花粉管通道显微注射受精卵感受态细胞Ca2＋4．目的基因的检测和鉴定(1)首先要检测转基因生物的DNA上是否插入了目的基因。(2)其次还要检测 。(3)最后检测 。(4)有时还需进行 。目的基因是否转录出了mRNA目的基因是否翻译出了蛋白质个体生物学水平的鉴定三、基因工程的应用与蛋白质工程1．基因工程的应用技术名称应用动物基因工程提高动物 来提高产品产量；改善畜产品品质；用转基因动物生产 ；用转基因动物作器官移植的 植物基因工程培育 植物、抗病转基因植物和 植物；利用转基因改良植物的品质生长速度药物供体抗虫转基因抗逆转基因技术名称应用基因治疗把 导入病人体内，使其 发挥功能，从而达到治疗疾病的目的，分为 基因治疗和 基因治疗表达产物正常基因体内体外2．蛋白质工程(1)蛋白质工程的目标是：根据 ，对 进行分子设计。(2)蛋白质工程的手段：对蛋白质的结构进行设计改造，最终必须通过 来完成。人们对蛋白质功能的特定需求蛋白质的结构基因考点一DNA重组技术的基本工具考情解读　 三种基本工具的作用涉及基因工程操作程序的关键步骤，近几年高考考查的频率较高，考查内容包括工具酶类型、实质及作用，运载体作用及特点等，预计2013年高考仍可能对各类型操作工具的作用及特点结合图形予以考查。[做一题][例1]　(2011·上海高考)回答下列有关基因工程的问题。(1)基因工程中使用的限制酶，其特点是____________。(2)下图四种质粒含有E1和E2两种限制酶的识别位点，Apr表示抗青霉素的抗性基因，Tcr表示抗四环素的抗性基因。①将两端用E1切开的Tcr基因与用E1切开的质粒X－1混合连接，连接后获得的质粒类型有________。(可多选)A．X-1 B．X-2C．X-3 D．X-4②若将上图所示X-1、X-2、X-3、X-4四种质粒导入大肠杆菌，然后分别涂布在含有青霉素或四环素的两种培养基上。在这两种培养基上均不能生长的大肠杆菌细胞类型有________、________。③如果X-1用E1酶切，产生850对碱基和3 550对碱基两种片段，那么质粒X-2(Tcr基因的长度为1 200对碱基)用E2酶切后的片段长度为________对碱基。④若将外源的Tcr基因两端用E2切开，再与用E2切开的X-1混合连接，并导入大肠杆菌细胞，结果显示，含X-4的细胞数与含X-1的细胞数之比为1∶3，增大DNA连接酶用量能否提高上述比值？________。原因是______________________________________。[解析]　 (1)基因工程中使用的限制酶，其特点是特异性地识别和切割DNA。(2)①用限制酶E1切开质粒X-1后，质粒X-1暴露出两个黏性末端，Apr被切下。两端用E1切开的Tcr基因含有与上述切割后的质粒X-1，Apr含有相同的黏性末端，混合后可形成X-1、X-2和X-3。②含质粒X-1的细胞可在含青霉素培养基上生长，含质粒X-2的细胞可在含四环素培养基上生长；含质粒X-3的细胞不含抗性基因，不能在两种培养基上生长；不含有质粒的细胞也不能在两种培养基上生长。③X-2的长度为1 200＋3 550＝4 750，用E2酶切后质粒由环状变为链状。