第一轮专题一基因工程第2课时.pptVIP

一、原核生物与真核生物的基因结构 1、原核生物基因结构 编码区 非编码区 非编码区 编码区上游 编码区下游 编码蛋白质 调控遗传信息的表达 （调控程序） …A‥………ATGTGCACGTAGTTA………‥G……T‥………TACACGTGCATCAAT………‥C… 启动子 终止子 （1）编码区和非编码区 能编码蛋白质的区段叫做编码区； 不能编码蛋白质的区段叫做非编码区， 在非编码区上有调控遗传信息表达的核苷酸序列 编码区 非编码区 非编码区 启动子 终止子 ATGTGCACGTAGTTA TACACGTGCATCAAT RNA聚合酶 AUGUGCACGUAGUUA 启动子：位于基因首端一段能与RNA聚合酶结合并能起始mRNA合成的序列。没有启动子，基因就不能转录。 RNA聚合酶:能够识别启动子上的结合位点并与其结合的一种蛋白质. 终止子：位于基因的尾端的一段特殊的DNA片断，它能阻碍RNA聚合酶的移动，并使其从DNA模板链上脱离下来，使转录终止。 （2）启动子、RNA聚合酶、终止子 编码区 非编码区 非编码区 （能编码蛋白质） 启动子 终止子 外显子 内含子 编码蛋白质 （不能编码蛋白质） 2、真核生物的基因结构 （1）外显子和内含子 外显子能编码蛋白质，内含子不能编码蛋白质。 （2）非编码区和非编码序列 非编码序列包括非编码区和编码区的内含子 终止子 原核细胞的基因结构 真核细胞的基因结构 ①相同点：都是由能够编码蛋白质的编码区和具有调控作用的非编码区构成。②不同点：原核细胞基因的编码区是连续的；真核细胞的编码区是间隔的，不连续的。 二、基因工程的基本操作程序： 阅读教材P8-12，回答下列相关问题： 1、基因工程的基本操作流程图： 1、从基因文库中直接获取: （1）基因文库的概念：见P9 （2）基因文库的分类:(按外源DNA片段的来源分类) 基因组DNA文库：含有一种生物的全部基因 部分基因文库：只包含了一种生物的部分基因， 如：cDNA文库 （3）建立基因文库的目的： 在未知基因序列的情况下，便于寻找并获得所需的大量的目的基因。 （4）基因文库的构建方法： ①直接分离法-----基因组文库 ②反转录法-----cDNA （一）目的基因的获取 生物材料 →分离DNA →→DNA片段→基因组文库 ↘分离MRNA→→ cDNA →cDNA文库 →①从基因文库 中获取 限制酶切割 反转录 ↘ ②利用PCR技术扩增 ③化学方法人工合成 提取某种生物的全部DNA 用适当的限制酶切 一定大小的DNA片段 将DNA片段与载体连接 导入受体菌中储存 基因组文库 基因文库的构建方法之一： ①直接分离法(鸟枪法) -----原核生物的基因组文库 用限制酶切成许多片断 在细胞质中将mRNA分离并加入反转录酶 合成第二条DNA链 真核细胞的基因 在细胞核内转录 原核细胞的基因: 在细胞质内转录 基因文库的构建方法之二： 反转录法：---主要是真核生物的cDNA mRNA DNA单链 cDNA 基因组文库：一般针对原核生物的基因，因为基因少 部分基因文库：一般针对真核生物的基因，如cDNA文库 文库类型 cDNA文库 基因组文库 文库大小 小 大 基因中启动子 无 有 基因中内含子 无 有 基因多少 某种生物的部分基因 某种生物的全部基因 物种之间的基因交流 可以 部分基因可以 说明 基因文库的组建过程就包含基因工程的基本操作步骤。从基因文库中获取目的基因的优点是操作简便，缺点是工作量大，具有一定的盲目性. 基因文库的构建方法 * * 生物材料 →分离DNA →→DNA片段→基因组文库 ↘分离MRNA→→ cDNA →cDNA文库 →①从基因文库 中获取 限制酶切割 反转录 ↘ ②利用PCR技术扩增 ③化学方法人工合成 （1）概念： （2）原理： 2、利用PCR技术扩增目的基因 ②四种脱氧核苷酸 ④一对引物： ③热稳定DNA聚合酶 ①模板DNA( 需含有目的基因 ) （4）条件： 一对寡核苷酸序列，与目的基因的起始段互补 一段已知目的基因的核苷酸序列，以便根据这一序列合成引物 （5）前提： ⑤加热 （3）过程： （6）结果： 指数 2n （7）PCR技术扩增与DNA复制的比较： DNA复制（碱基互补配对原则） 以_____方式扩增，即____扩增（n为扩增循环的次数） 是一项在已知特定DNA片段的碱基序列情况下，在生物体外复制特定DNA片段的核酸合成技术。 （4）过程： 高温变性（解旋为单链） 低温退火（引物与单链互补序列结合） 适温延伸（在Taq酶的作