酵母菌杂交育种1.pptVIP

酵母菌杂交育种;目录;一酵母菌杂交特点;1酵母菌细胞结构和菌落形态; 酵母菌的细胞结构与细菌相似，但比细菌细胞大得多。一个椭圆形的酵母菌细胞长约7.2um，宽5.6nm(圆形直径1—5um) . 菌落大而厚，菌落表面湿润、粘稠并多呈乳白色，少数为红色。 菌落特征 表面湿润、粘稠，大多数是乳白色，少数红色（红酵母），在固体培养基上生长时间长了，颜色变暗，呈绉缩状。 ;2酵母菌生活史和繁殖方式;酵母菌的生殖方式 　酵母菌可以进行无性生殖，也可以进行有性生殖。无性繁殖包括芽殖、裂??(即少数种类的酵母菌与细菌一样，借细胞横分裂而繁殖)、芽裂(这种方式很少)三种。其中最主要还是出芽生殖(简称芽殖)，即成熟的酵母菌细胞先长出一个小芽体，芽体细胞长到一定程度脱离母细胞继续生长，而后形成一个新个体。有性生殖是以形成子囊孢子的方式进行。;3酵母菌的杂交;二酵母菌杂交育种的法;1 标记菌株的选择;营养缺陷型菌株的筛选过程;２．１抗生素法：是利用野生型菌株能在MM中生长，而缺陷型不能生长，于是将诱变处理液在MM中培养短时让野生型生长，处于活化阶段，而缺陷型无法生长，仍处于“休眠状态”，这时，加入一定量的抗生素，结果活化状态的野生型就被杀死，保存了缺陷型。在选择抗生素时，细菌可以用青霉素，酵母可用制霉菌素。 ;2．２菌丝过滤法：只适用于丝状真菌，其原理是在基本培养基中，野生型的孢子能发芽成菌丝，而营养缺陷型则不能。因此将诱变处理后的孢子在基本培养基中培养一段时间后，再进行过滤。 如此重复数次后，就可以除去大部分野生型菌株，同样达到“浓缩”营养缺陷型的目的。? ;具体方法：影印法、点种法、夹层法 、限量补充培养法 夹层培养法 限量补充培养法 影印接种法 逐个检出法; 酵母菌的杂交;子囊孢子分离和单倍体的获得 菌株活化后接入产孢培养基，3天后镜检观察，无菌水(2ml)倾于斜面上，用接种环刮下菌体，收集菌悬液于7ml离心管中，6000rpm离心 10min收集菌体。0.85%生理盐水悬浮洗涤1~2次，分别加入 0.7mlTris一Hcl(pH8.0，0.01M);200ul 10%蜗牛酶(终浓度为0.02):l00ul 10%琉基乙醇(终浓度为0.01)，120rpm(缓慢振荡)培养16h破子囊壁，使孢子释放。利用孢子比营养细胞耐热特性，采用58℃高温致死处理营养细胞，离心收集孢子，并用Tris一HCI(pH8.0，0.01M)洗涤两次。取适当稀释倍数，涂布于YPD平板上，28℃培养2一3d。 ;单倍体的鉴定： 培养后挑取小菌落，镜检观察是否为单倍体。将获得的疑是单倍体再接入产孢培养基，培养7天左右观察子囊形成，以确定是否为真正的单倍体。有子囊形成者基本确认为二倍体，不形成子囊者基本确认为单倍体。把确定为单倍体的菌株分别保种(YPD斜面、甘油管)。 ;单倍体交配型的确定 单倍体菌株与标准菌株在YPD斜面活化后，分别接种到装有10mlYPD液体培养基的250ml三角瓶中培养，30°C，200rpm/min，24h。取lml待测的单倍体菌株菌液和lml标准菌株菌液接种到新鲜的10mlYPD液体培养基中，30℃，200rpm/min镜检观察哑铃形细胞产生，混合菌液培养过夜后离心(300rpm/min，5min)，菌体沉淀后接种到产孢培养基中培养3一7天，镜检观察有无子囊产生，确定交配型，能与a型标准菌株杂交并且产孢的菌株交配型为α；能与α型标准菌株杂交并且产孢的菌株交配型为a。;单倍体杂交与二倍体的检出 将a型与α型单倍体菌株混合接种于YPD液体培养基中，30℃摇床培养，镜检观察接合子的形成情况。镜检杂交完成后吸取适量菌液，涂布于基本培养基平板，30°C培养。挑取较大的单菌落，在产孢培养基上鉴定菌株的产孢能力，能够产孢的菌株确定是经杂交形成的二倍体菌株，编号保存。 ;单倍体杂交与二倍体的检出 将a型与α型单倍体菌株混合接种于YPD液体培养基中，30℃摇床培养，镜检观察接合子的形成情况。镜检杂交完成后吸取适量菌液，涂布于基本培养基平板，30°C培养。挑取较大的单菌落，在产孢培养基上鉴定菌株的产孢能力，能够产孢的菌株确定是经杂交形成的二倍体菌株，编号保存。 ;;高耐性酿酒酵母的杂交育种;YEPD培养基（酵母浸出粉胨葡萄糖培养基，加入琼脂的又叫酵母膏胨葡萄糖（YPD）琼脂培养基） 用于酵母菌的培养 　　 配方：　　　表一　　 ;;;;;;;;;