核酸分子杂交研究生课程.pptxVIP

内容提要;第一节 分子杂交概念与基本原理 Concept Principle of Molecular Hybridization ; 单链的核酸分子在合适的条件下，与具有碱基互补序列的异源核酸形成双链杂交体的过程称核酸分子杂交（molecular hybridization）;;二、分子杂交基本原理;;;2、变性的方法 （1）热变性：温度升高到90~100℃时，双链核酸分子链间的氢键完全断裂。 （2）酸碱变性：pH值低于3或高于10时，双链核酸分子链间的氢键断裂。 （3）化学试剂变性：如尿素、甲酰胺、甲醛纯水等使双链核酸分子链间的氢键断裂。;3、DNA变性曲线 AT区先解链 GC区后解链 阶梯式曲线 ;DNA变性的基本过程; （G+C）%=（Tm-69.3) ×2.44 Tm =(G+C)%×0.41+69.3;定义：变性的单链核酸分子在一定条件下 按碱基互补原则重新结合为双链核酸的过程， 称复性或杂交。 具有互补序列两条单链都可形成双链： DNA/DNA、RNA/DNA、RNA/RNA、寡核苷酸/DNA和寡核苷酸/RNA。;; 三、影响杂交（复性）的因素;2、温 度 （1）DNA/DNA杂交，适宜温度较Tm值低20～25℃ （2）RNA/DNA或RNA/RN