三大肠杆菌基因工程3.pptxVIP

第1页/共67页第三章 大肠杆菌基因工程Escherichia coli （SEM，×14000） 第2页/共67页第三章 大肠杆菌基因工程一、 大肠杆菌表达（生产）系统的优缺点二、大肠杆菌表达系统高效表达原理三、工程菌构建策略四、工程菌构建、分析、发酵与产物分离纯化五、利用大肠杆菌系统生产重组蛋白案例第3页/共67页四、工程菌构建、发酵与产物分离纯化工程菌构建发酵工艺研究分离纯化工艺研究第4页/共67页 工程菌构建研究内容与技术路线目的蛋白分析表达载体构建与分析转化与表达筛选表达载体与宿主菌株选择表达产物确证目的基因的获得与优化工程菌稳定性分析工程菌菌种保存第5页/共67页 工程菌构建主要研究内容1、目的蛋白分析： 糖基化？难表达？难复性？药用？1)理化特性() *分子大小：≤5KD、≥100KD难表达（融合表达、截短表达）*氨基酸组成：Cys、Pro多的难表达（用真核系统）*疏水性：疏水性强的难表达（截短表达、用真核系统）2)生物学特性：膜蛋白难表达（截短表达、用真核系统）第6页/共67页 工程菌构建主要研究内容3)用途药用：安全性、产量、成本（包涵体、独立表达）工业用：产量、成本（包涵体、独立表达）研究用：迅速获得活性产品为首要考虑（可溶、融合表达）第7页/共67页 工程菌构建主要研究内容2、选择表达载体与宿主菌株： 1）表达载体选择 启动子、标签、标记基因、拷贝数等。