实验一 光学显微镜技术.pptxVIP

实验报告一、实验目的 二、实验原理 三、实验材料 四、实验步骤 五、实验结果及分析 六、作业实验一 光学显微镜技术实验目的了解普通光学显微镜、暗视野显微镜、相差显微镜和微分干涉显微镜的构造、工作原理和使用方法。学习测微尺的用法并测量细胞的大小。实验用品显微镜,目镜测微尺(eyepieces or ocular micrometer ), 镜台测微尺（stage micrometer）, 载玻片, 盖玻片等。 实验材料 小肠切片 鸡红细胞采鸡血（阿氏液：血2：1) ( 阿氏液 红细胞保存液： 葡萄糖2.05g 柠檬酸钠0.88g 氯化钠0.42g 加蒸馏水至100ml，过滤分装，灭菌后在0－4℃冰箱中可保存两周。)夹竹桃叶片横切片 洋葱 普通光学显微镜光镜主要由三部分组成：（1）光学放大系统：目镜与物镜（2）照明系统（3）机械和支架系统调节光瞳间距，使左、右两个视场像合二为一;调节屈光度以适应观察者的视力，调节方法随镜的不同而不同. 物镜标示 将孔径光阑缩至物镜数值孔径的60%～80%或合适的范围。注意：当物镜或标本更换时，需重新调节视场光阑和孔径光阑。注意事项移动显微镜，一手托镜座，一手拿镜臂!更换物镜时，转动物镜转换盘!使用油镜后，用镜头液清洗镜头。只有100倍物镜为油镜，在低倍镜下调焦清晰后，再转到油镜!固定切片不要使用油镜!暗视野显微镜原理：利用暗视野聚光器使入射光束从聚光器斜向照明样品，使之发出反射和散射光。由样品发出的散射光和反射光形成了明亮的物体影象。背景是黑暗的。相差显微镜 原理： 利用相差装置将透过细胞标本不同区域（密度不同）的光的光程差变成振幅差，从而使细胞内的各种结构之间呈现出清晰可见的明暗差异的显微镜。 在构造上，相差显微镜有不同于普通光学显微镜两个特殊之处： 1.环形光阑（annular diaphragm） 位于光源与聚光器之间，作用是使透过聚光器的光线形成空心光锥，焦聚到标本上。 2.相位板（annular phaseplate）在物镜中加了涂有氟化镁的相位板，可将直射光或衍射光的相位推迟1/4λ。分为两种： A+相板：将直射光推迟1/4λ，两组光波合轴后光波相加，振幅加大，标本结构比周围介质更加变亮，形成亮反差（或称负反差）。 B+相板：将衍射光推迟1/4λ，两组光线合轴后光波相减，振幅变小，形成暗反差（或称正反差），结构比周围介质更加变暗。微分干涉显微镜DIC利用的是偏振光，有四个特殊的光学组件：偏振器（polarizer）、DIC棱镜、DIC滑行器和检偏器（analyzer）。偏振器直接装在聚光系统的前面，使光线发生线性偏振。优点是能显示结构的三维立体投影影像。 四种不同显微镜显微镜所拍摄的体外培养成纤维细胞图像比较 （A）普通明视场显微镜 （B）相差显微镜 （C）微分干涉显微镜 （D）暗场显微镜 实验内容和方法细胞形态的观察细胞大小的测量不同形状的动植物细胞一、细胞观察动物细胞的观察 植物细胞的观察 小肠切片: 细胞的形状，细胞核，核仁，细胞质 鸡血红细胞: 红细胞的特点夹竹桃叶横切片: 表皮细胞和叶肉细胞洋葱表皮细胞: 内表皮细胞1、红细胞2、中性粒细胞 3、嗜酸性粒细胞4、嗜碱性粒细胞5、单核细胞 6、淋巴细胞7、异嗜性粒细胞8、凝血细胞Onion epidermal cells二、细胞测量如何使用测微尺?如何测量细胞的大小?如何计算细胞的大小?如何使用测微尺?目镜测微尺（Eyepiece micrometer）镜台测微尺（Stage micrometer）目镜测微尺镜台测微尺 镜台测微尺的格数目镜测微尺每格的微米数 = ------------------------------ ?10 目镜测微尺的格数 如何测量细胞的大小?测量一个洋葱表皮细胞的大小 如何计算细胞的体积?椭球形 V=4πab2/3圆球形V=4/3πr3圆柱形V=πr2h* a: 长半径; b: 短半径； r: 半径; h: 高作 业 计算不同倍数物镜下，一格目镜测微尺所代表的长度。物镜目镜测微尺的格数镜台测微尺的格数目镜测微尺每格的微米数4X10X40X绘洋葱表皮细胞的模式图，计算细胞的面积，注明物镜的倍数；说明动物细胞和植物细胞的异同点 。12345平均长宽暗视野、相差、微分干涉显微镜与普通光学显微镜相比在结构上有何特点及用途。镜油瓶的使用方法(1)(2)(3)(4)镜油瓶的使用方法(5)(6)(7)细胞生物学实验绘图方法与要求一、在仔细观察的基础上，选择典型结构进行描绘，要求真实、准确(注意各部结 构的比例关系)。二、用铅笔绘图，线条要明确清晰，图的深浅明暗一律以点的疏密来表 示，点要圆而一致，不得涂暗影或进行其它美术加工。 三、各部结构名称要在一侧引直线注明。各引线要平