基因克隆原核表达.pptxVIP

基因的克隆与表达 山东大学医学院免疫学研究所 马春红;基因克隆(gene clonging) 基因表达(gene expression) -原核基因表达 -真核基因表达 ;基 因 克 隆 Gene Cloning;概述 克隆载体 受体细胞 体外重组的策略 基因克隆工作流程;一、概 述;1973年Cohen完成第一个基因工程实验;基因克隆（分子克隆molecullar cloning）----通过体外重组技术,将一段目的DNA经切割、连接插入适当载体，并导入受体细胞，扩增形成大量子代分子的过程。;基因克隆的核心-----体外重组(Recombination) : 人工将一段目的DNA插入一个载体的过程。 ;基因克隆的技术路线 目的基因 载体 ;二、克隆载体;三、受体细胞 1、定义：外源DNA导入的细胞，是重组体扩增的场所。 2、要求：易于接纳外源DNA 无特异的内源性核酸内切酶 载体复制、扩增不受阻 与载体有互补性;四、体外重组的策略 1、粘末端连接 1）全同源粘末端连接 最方便简单 高背景-载体自身环化 双向插入;2）定向克隆：使外源基因定向插入到载体中的克隆策略 粘-粘连接：最有效、最快