Q_102200 ISY J2.2-2018微生物基因勘探 烃氧化菌数量检测方法（荧光定量PCR法）.pdf

Q/102200 ISY J2.2-2018 Q/ISY 英索油能源科技（北京）有限责任公司企业标准 Q/102200 ISY J2.2-2018 微生物基因勘探 烃氧化菌数量检测方法 （荧光定量PCR 法） 2018-12-01 发布 2018-12-01 实施 英索油能源科技（北京）有限责任公司 发布 Q/102200 ISY J2.2-2018 目 录 前言 1 1 范围2 2 设备和试剂2 3 检测程序2 3.1 样品制备2 3.1.1 样品前处理2 3.1.2 基因组DNA 提取2 3.1.3 基因组DNA 电泳检测3 3.1.4 基因组DNA 质量检测3 3.2 检测指标选择3 3.3 标准品制备3 3.3.1 PCR 扩增3 3.3.2 TA 克隆3 3.3.3 鉴定阳性克隆3 3.3.4 提取质粒4 3.4 样本检测4 3.4.1 反应体系配置4 3.4.2 配置标准样4 3.4.3 加样4 3.4.4 设置PCR 反应程序4 3.4.5 PCR 反应5 3.5 数据处理5 Q/102200 ISY J2.2-2018 前言 本标准根据相关国家及行业标准，结合本公司技术应用情况及试验设备水平制定。 本标准由英索油能源技术（北京）有限责任公司提出。 本标准由英索油能源技术（北京）有限责任公司归口。 本标准负责起草单位：英索油能源技术（北京）有限责任公司。 本标准主要起草人：罗楚平、洪莉、张勇。 本标准历次发布（修订）：Q/102200 ISY J2.2-2018 替代Q/102200 ISY 02-2018 。 1 Q/102200 ISY J2.2-2018 1 范围 本标准规定了微生物基因勘探技术应用过程中，土壤或沉积物样品中烃氧化菌使用荧光 定量PCR 法检测时的标准流程。 2 设备和试剂 涡旋振荡仪 离心机 微量分光光度计 电泳仪 凝胶成像系统 荧光定量PCR 仪 土壤基因组DNA 提取试剂盒 DNA 胶回收试剂盒 质粒提取试剂盒 PremiSTAR HS Puc-T TA cloning kit 感受态细胞DH5α SYBR® Premix Ex Taq™ II (Tli RNaseH Plus), ROX plus DL2,000 DNA Marker 除另有规定外，本标准所使用的试剂为分析纯或生化试剂，水为无菌双蒸水。 3 检测程序 3.1 样品制备 3.1.1 样品前处理 冷冻保存的样品直接称量。 保护液保存的样品在称量前1000 rpm 离心1 min ，取底部