核素示踪技术检验核医学.pptVIP

Radionuclide Tracing Technique;教学目的;重点与难点;Introduction概 述;什么是示踪技术？What is tracing technique?;1923年 Hevesy 212Pb→植物不同部位铅含量 32P→磷在生物体内代谢 1952年 Hershey 32P、35S →DNA遗传信息 1959年 Berson、Yalow →RIA Meselson、Stahl →DNA半保留复制 RNA-DNA逆转录、遗传的三联密码、细胞周期、微量物质测量等均离不开示踪技术。;第一节 核素示踪原理与设计;为什么用放射性核素作为示踪剂？;35S;一、示踪原理（ Principle ）;2、示踪剂的可测性（可测性） 放射性核素能自发地放射出射线。利用高灵敏度的仪器可对示踪剂进行精确的定量、定位、定性探测。动态观察各种物质在生物体内的量变规律。 ;二、示踪实验设计要点;1、科学选择示踪剂;（1）半衰期;（2）辐射类型和射线能量;（3）示踪原子标记位置;（4）放射化学纯度;（5）放射比活度;例： 静脉注射示踪剂，被观察组织摄取该示踪剂的量约占总量的1%，拟10天后取样，在此期间示踪剂从该组织中消失约为摄入量的90%，取样约占该组织的10%，仪器测量效率为50%，本底为125cpm。 计算： 最少放射性dpm：125×2÷50%=500dpm 取样时该组织的总dpm：500÷10%=5000dom 初始时该组织的总dpm： 5000÷（1-90%）÷1%=5×106dpm 初始引入的示踪剂用量：5×106 ÷60=83.8KBq;2、防止实验过程中的交叉污染;3、注意安全防护;4、妥善处理放射性废物;三、核素示踪实验的特点;第二节 放射性核素标记化合物;第三节 相关核素示踪技术;一、核素稀释法;如分析对象为液体，以及稀释前后物质在深液中的浓度基本不变，则可用放射性浓度（如dpm/ml）代替放射性比活度，用稀释前后的v代替质量m，则上式可写成： C2（v1+v2）=C1v1 若C2C1，则：C2v2=C1v1;2、正稀释法;例1：;例2：;2、反稀释法;3、核素稀释法的优点;三、物质转化示踪技术;1、掺入实验;（1）主要技术参数;（2）应用举例;2、微生物放射性测量;3、其他;四、核酸探针标记技术;核酸探针;1、核酸探针的分类;2、核酸探针的标记;（1）DNA全链标记;2）标记cDNA A、单链DNA探针的标记 B、随机引物DNA标记 C、RNA互补的cDNA标记;（2）DNA末端???记;（3）RNA的全链标记;五、活化分析;活化分析的应用;思考题;