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2020-02-24 发布于河北
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FAD染色法.doc

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花粉粒有可育和不育两种，通过一种可以指示膜的完整性的酶对花粉粒进行染色，由于只有可育的花粉在显微镜下可以观察到荧光，而不育的没有，因此可以将两者区别。一、材料和试剂 1. BKbufferS 15 M OPSpH7.5 2. 醋酸荧光素（FDA） 3. Source：拟南芥花粉 4. 取样：开花期 5. 染色：Stock醋酸荧光素（FDA）溶液2 mg FDA/mlof丙酮（在离心管中-20°C保存）。二、设备 1. 荧光显微镜三、步骤 1. 取1 ul FDA母液加入到1mloftheBKbufferS 15 M OPS，pH7.5。注意：FDA母液非常易挥发–混合FDA-buffer时不要超过2个小时。 2. Mounting：滴一滴FDA-buffer混合液到用酒精清洗过的载玻片上，放上一些花粉粒到溶液里，盖上盖玻片。 3. 观察：在蓝光下（wavelength=495 nm）用光学显微镜观察。有活力的花粉粒显示荧光（FCR+）。注意：醋酸荧光素，是无极性、无荧光的分子，穿入到花粉粒中。它被花粉的酯酶类水解释放荧光素，一个极性荧光分子，当花粉粒的膜是完整的，荧光素会在花粉粒的内径积累，就会在蓝光下显示荧光。FCR检测可以让我们知道花粉粒酯酶的活性和膜的完整性。