分子生物学第二章染色体与DNA　完整课件.ppt

转座子的分类和结构特征 转座子存在于所有生物体内，人类基因组中由35%的序列为转作序列，其中大部分与疾病有关。转座子分为两大类： 插入序列（insertional sequence, IS） 复合型转座子（composite transposon） * 转座 插入序列（IS因子） 最简单的转座子，不含任何宿主基因。 特征： 很小的DNA片段 末端具有倒置重复序列 复制宿主靶位点DNA（4-15bp） 转座频率10-4-10-3/世代 恢复频率10-10-10-6/世代 转座 复合型转座子 复合型转座子是一类带有某些抗药性基因（或其它宿主基因）的转座子。 特征： 复合型转座子两翼往往是两个相同或高度同源的IS序列。 IS序列插到功能基因的两端就可能产生复合型转座子。 复合型转座子的转座能力由IS序列决定和调节的。 复合型转座子 复合型转座子还有一类无IS序列、体积庞大的的转座子（5000bp以上）——TnA家族。 TnA特征： 携带3个基因，其中 一个为编码β-内酰胺 酶基因（AmpR） 两翼都有38bp的倒置 重复序列（IR） 2. 真核生物中的转座子 转座子也存在于真核生物中。在玉米和果蝇中发现了多个在基因组内随机分布而且能重复移动的转座因子序列。 玉米中的转座子 Ac-Ds系统 Spm-dSpm系统 果蝇中的转座子：P转座子（可诱发杂种不育） 转座 3. 转座作用的机制 限制性内切酶切开靶序列 转座子插入，形成具有单链粘性末端的转座子 修补缺刻，形成直接重复序列。 转座 3. 转座作用的机制 转作可分为复制型和非复制型两大类 复制型（TnA类） 非复制型（IS序列、Mu及Tn5） 复制型 非复制型 5.哺乳动物中端粒末端形成大的环状结构, 环状DNA+蛋白质 保护染色体3’端的稳定 图12-17 端粒的环状结构 2.8 DNA复制的调控 2.8.1 原核细胞DNA的复制调控 原核细胞的生长和增殖速度取决于培养条件，但在生长增殖速度不同的细胞中DNA链延伸的速度几乎是恒定的，只是复制叉的数量不同。 细胞内复制叉的多少决定了复制起始频率的高低，这可能是原核细胞复制的调控机制。复制起始频率的直接调控因子是蛋白质和RNA。 ColEl质粒DNA的复制调控 ColEl是一个6646碱基对的小质粒。ColEl DNA复制不依赖于其本身编码的蛋白质，而完全依靠宿主DNA聚合酶I。 质粒DNA编码两个负调控因子Rop蛋白和反义RNA（RNA1），它们控制了起始DNA复制所必需的引物合成。引物RNA前体的转录起始于复制起点上游555个核苷酸处，需经RNaseH加工后产生有555个核苷酸的引物，然后由DNA聚合酶I在引物的3末端起始DNA合成。RNA1的编码区在引物RNA编码区的5末端，转录方向与引物RNA相反，因此与引物RNA的5末端互补。 RNA1通过氢键配对与引物RNA前体相互作用，阻止了RNaseH加工引物前体，使其不能转化为有活性的引物而对复制起负调控作用。 　RNA1与引物RNA分子的相互作用是可逆的，因此细胞内RNA1的浓度决定了ColEl质粒的复制起始频率。 另一个负调控因子Rop蛋白能提高RNA1与引物前体的相互作用，从而加强了RNA1的负调控作用。 ? 2.8.2 真核细胞DNA的复制调控 真核细胞的生活周期可分为4个时期： G1、S、G2和M期。 G1是复制预备期，S为复制期，G2为有丝分裂准备期，M为有丝分裂期。 DNA复制只发生在S期。 DNA replication at phase S of cell cycle S 6-8hs M 1h G2 3-4hs mammalian cell 22-25hrs 500-5000 bp/min G1 12hs 真核细胞中DNA复制有3个水平的调控： ①细胞生活周期水平调控，也称为限制点调控，即决定细胞停留在G1期还是进入S期。 ②染色体水平调控，决定不同染色体或同一染色体不同部位的复制子按一定顺序在S期起始复制，这种有序复制的机理还不清楚。 ③复制子水平调控，决定复制的起始与否。这种调控从单细胞生物到高等生物是高度保守的。 　许多参与复制起始蛋白的功能与原核生物中相类似 2.9 DNA的损伤修复 2.1 DNA损伤的原因及部位 2.2 DNA损伤修复的类型 损伤原因： 复制错误 DNA重组 物理化学因子 损伤部位：碱基、戊糖或是磷酸二酯键 2.９.1 DNA损伤的原因及部位 2.９.2 DNA修复的类型 2.９.2.1 错配修复 2.９.2.2 碱基切除修复 2.９.2.3 核苷酸切除修复 2.９.2.4 DNA直