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肌肉组织氨基移换作用 （纸层析法）一、实验目的1. 了解氨基移换作用的原理。2. 熟悉纸层析法的基本原理。3. 掌握纸层析法分离鉴定氨基酸的方法。二、实验原理 氨基移换作用（转氨基作用）在转氨酶的作用下，某一氨基酸去掉α-氨基生成相应的α-酮酸，而另一种α-酮酸得到此氨基生成相应的氨基酸的过程。GPT谷氨酸 +丙酮酸α-酮戊二酸 +丙氨酸GOT谷氨酸 +草酰乙酸 α-酮戊二酸 +天冬氨酸 人体内最重要的两种转氨酶：谷丙转氨酶（GPT）/丙氨酸转氨酶（ALT） 谷草转氨酶（GOT）/天冬氨酸转氨酶（AST）正常人各组织中GPT及GOT 活性 (单位/克湿组织)组 织GPT GOT组 织GPT GOT 肝44000 142000胰 腺2000 28000 肾19000 91000脾1200 14000 心7100 156000肺700 10000 骨骼肌4800 99000血清16 20血清转氨酶活性，临床上可作为疾病诊断和预后的指标之一。α-酮戊二酸 丙氨酸谷氨酸 丙酮酸2. 层析 层析系统通常都有两个相组成：固定相和流动相。混合物在层析系统中的分离决定于该混合物的组分在这两相中的分配情况，一般用分配系数来描述。常用的分配层析包括柱层析、纸层析、薄层层析。纸层析法固定相：吸附在滤纸纤维之间的水分流动相：层析液水饱和酚谷氨酸：亲水性氨基酸丙氨酸：疏水性氨基酸分离原理：利用混合物各组分在固定相和流动相中分配系数差异而分离3. 显色反应茚三酮与α-氨基酸反应生成紫红色化合物相对迁移率Rf三、实验步骤1、酶液的制备2、氨基移换反应 加入物（ml）对照管测定管 肌匀浆10滴10滴煮沸 5 min37 ℃ 5 min0.1 mol/L丙氨酸溶液0.5 ml0.5 ml0.1 mol/Lα-酮戊二酸溶液0.5 ml0.5 ml0.01 mol/L 磷酸盐缓冲液1.5 ml1.5 ml混匀， 37 ℃ 50 min 煮沸5 min3、层析圆滤纸上标记点样制作滤纸芯滤纸芯插入圆滤纸组装层析装置4、显色把层析后的滤纸取下，吹风机吹干后，用喷雾器均匀喷洒0.5％茚三酮溶液，再用吹风机吹干。四、实验结果计算各个色斑的Rf值五、结果分析 分析色斑的成分以及是否发生氨基移换反应
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