九免疫荧光染色观察肿瘤细胞骨架.pptxVIP

免疫荧光染色观察肿瘤细胞骨架;实验目的与要求;一、实验的基本原理;;玻片细胞置于甲醇中-10℃固定5min，室温凉干（或冷丙酮固定5min，室温凉干）；PBS漂洗2min×3次；3% H2O2室温孵育10min（以去除细胞内源性过氧化物酶活性）；PBS漂洗5min×3次；10%正常羊血清封闭液（0.1M PBS配制）室温封闭20min；弃封闭液（此步骤不必PBS洗涤）；; 用适当比例稀释的一抗（一般稀释比为1:100-1:200）37℃孵育1h（或4℃孵育过夜）；PBS漂洗5min×3次；用适当比例稀释的二抗（FITC标记的IgG）（一般稀释比为1:100-1:200，用加有BSA的TBS－T配制）室温孵育30min（避光黑暗条件下进行）；PBS漂洗5min×3次；甘油/PBS封片剂（PBS: 甘油=1：9，v/v，pH8.0-8.5）封片；荧光显微镜或激光共聚焦扫描显微镜观察拍照。;五、注意事项1. 注意各级抗体浓度的使用范围;2. 荧光抗体孵育时要注意避光;3. 注意各步骤的漂洗要充分.;六、作业与思考题试述免疫荧光技术的基本原理,并描述实验中所观察的实验现象.思考题:试比较免疫荧光技术与免疫细胞化学技术的异同.