基因工程的基本程序.pptxVIP

;一、目的基因的获取;;;3)基因组DNA文库与cDNA文库;;依据：目的基因的有关信息。 如：根据基因的核苷酸序列 基因的功能 基因在染色体上的位置 基因的转录产物mRNA 基因翻译产物蛋白质等特性;1、构建基因组DNA文库时，首先应分离细胞的 A、染色体DNA?? B、线粒体DNA C、总mRNA?? D、tRNA ;2、利用PCR技术扩增目的基因;PCR——聚合酶链式反应 是一项生物体外复制特定DNA片段的核酸合成技术。 通过此技术，可获取大量的目的基因。; 以__ ___方式扩增， 即___ _（n为扩增循??的次数）;前提： 原料 ;PCR技术的操作过程;PCR技术扩增与DNA复制的比较;反转录法;3、在遗传工程中，若有一个控制有利性状的DNA分子片段为ATGTG／TACAC，要使其数量增多，可用PCR技术进行人工复制，复制时应给予的条件是 ①双链DNA分子为模板 ②ATGTG或TACAC模板链 ③四种脱氧核苷酸 ④四种核苷酸 ⑤DNA聚合酶 ⑥热稳定DNA聚合酶⑦引物 ⑧温度变化 ⑨恒温 A．①③④⑦⑨ B．①④⑥⑦⑧ C．②⑤⑥⑦⑨ D．①③⑥⑦⑧;4、在基因工程中，把选出的目的基因（共1000个脱氧核苷酸对，其中腺嘌呤脱氧核苷酸是460个）放入DNA扩增仪中扩增4代，那么，在扩增仪中应放入胞嘧啶脱氧核苷酸的个数是 A.540个 B.8100个 C.17280个 D.7560个;5、在已知序列信息的情况下，获取目的基因的最方便方法是 A、化学合成法? ? B、基因组文库法 C、cDNA文库法?? D、聚合酶链反应;二、基因表达载体的构建 ——基因工程的核心;2、基因表达载体的组成：;启动子：位于基因的首端的一段特殊的DNA片断，它是RNA聚合酶识别和结合的部位，有了它才能驱动基因转录出mRNA，最终获得蛋白质 终止子：位于基因的尾端的一段特殊的DNA片断，能终止mRNA的转录 标记基因的作用是为了鉴别受体细胞中是否含有目的基因，从而将有目的基因的细胞筛选出来;①载体与表达载体的区别：二者都有标记基因和复制原点两部分DNA片段。表达载体在载体基础上增加了目的基因、启动子、终止子三部分结构 ②用到的工具酶：既用到限制酶切割载体，又用到DNA连接酶将目的基因和载体拼接，两种酶作用的化学键都是磷酸二酯键 ③启动子、终止子对于目的基因表达必不可少 ④目的基因不能单独进入受体细胞，必需以表达载体的方式携带进去。;基因表达载体除含有目的基因外，还需要以下元件：; 已知标记基因有抗四环素基因和抗氨苄青霉素的基因，现探讨某细菌的质粒中有无标记基因或标记基因是什么？请设计实验、预期实验结果，并得出相应的实验结论。;;基因表达载体除含有目的基因外，还需要以下元件：;三.将目的基因导入受体细胞;1、将目的基因导入植物细胞的方法：;③过程：;原理：;农杆菌转化法中有二次拼接和二次导入。第一次拼接是将目的基因拼接到Ti质粒上TDNA的中间部位，第二次拼接(非人工操作)指被插入目的基因的TDNA被拼接到受体细胞的染色体DNA上；第一次导入是将含目的基因的Ti质粒导入农杆菌，第二次导入(非人工操作)是指含目的基因的TDNA进入受体细胞。; 因为动物体细胞的全能性受到一定限制，故一般将目的基因导入动物的受精卵或卵细胞，而不是体细胞；而植物体细胞的全能性相对容易表达，故一般将目的基因导入植物的体细胞，然后再通过植物组织培养技术获得转基因植株。;（2）基因枪法:;2、将目的基因导入动物细胞 ①方法：显微注射法 ②程序： ;3、将目的基因导入微生物细胞 ①原核生物特点： 繁殖快、单细胞、遗传物质少 ②方法：; 四、目的基因的检测与鉴定;1、鉴定——分子水平的鉴定;基因探针---是一段带有检测标记，且序列已知的，与目的基因互补的核酸序列。 基因探针通过分子杂交与目的基因结合，产生杂交信号，能从浩翰的基因组中把目的基因显示出来。;？;基因探针有哪些用途？;;下列有关“基因探针”的叙述，最恰当的是（　　）A．基因探针的工作原理是碱基互补配对 B．待测的DNA分子首先要解旋变为单链，才可用基因探 C．基因探针技术可用于疾病诊断和环境监测 D．以上都正确;1、鉴定——分子水平的鉴定;1、鉴定——分子水平的鉴定;;2、鉴定——个体水平的鉴定;归纳: 基因工程的基本操作程序;1、基因表达载体必要的元件除目的基因外，还需有_______、_______和_________;练习1：(2008理综山东卷)为扩大可耕地面积，增加粮食产量，黄河三角洲等盐碱地的开发利用