模拟生物膜制备与结构原子力显微镜研究.pptVIP

* * 实验3 模拟生物膜的制备与结构的原子力显微镜研究 吴俊林 一、研究的目的意义 近些年来，生物膜模型的研究成为了当前化学和生物学中最活跃的领域之一。生物膜在细胞区间化、调节物质的通透和输运、细胞外信号的响应、细胞间的相互作用、定位生物活性和能量的转换方面起到关键的作用。因此，如果能了解细胞膜的形成机制以及结构和功能，不仅对于阐明生物膜结构的形成机制具有重要的意义，对进一步指导生物膜与人类疾病方面均有重要的意义。生物膜在组装方面目前主要是利用配比不同比例的膜成份来研究脂类与蛋白质/蛋白质和蛋白质间的相互作用，从形态和形成机理方面实现生物膜的组装。 虽然生物膜的组织成份结构不同，但是它们的制备方法和检测手段却大致相同。本实验要求学生自行设计生物膜组装，包括选择制膜材料、确定选取材料的配比等，选用最佳的制备方法进行制膜，再对它进行相关的性能的测试，研究和讨论其结构形成机制和生理状态下的生物膜间的关系。通过这一研究性的实验，在学习设计、制备和研究生物膜组装的过程中，深入了解生物膜成份间相互作用的原理，掌握制膜方法与多种检测技术，提高从事科学研究工作的能力。 二、实验室可提供的仪器设备及材料 1. LB膜仪 （KSV-Minitrough） 2.原子力显微镜（Atomic force microscopy） 3.制膜材料（磷脂、胆固醇等） 4. 清洗材料 5.旋转蒸发器 6.超声清洗器 7.数字显示磁力搅拌器 8.常用化学试剂（分析纯） 9.各种玻璃仪器 10.其它材料 三、研究内容（任选一部分或几部分进行研究）、方 法及要求 （一）设计和制备单层脂膜，测量并研究其界面和热力学性质 1. 根据实验要求选定制膜材料。 2. 制定镀膜方案。 3. 镀膜 4. 记录分析界面和热力学性质 5. 用原子力显微镜研究膜的表面形貌 6. 分析讨论测量结果 （二）设计和制备脂双层膜，测量研究金属离子对膜动力学和 形态的影响 1. 根据实验选定制膜材料 2. 配制不同浓度的盐溶液作为亚相 3. 制膜 4. 记录界面和热力学性质 5. 用原子力显微镜研究形态变化 6. 分析讨论测量结果 （三）设计和制备细胞膜的特定成份，分析生理状态下各成 份的比例 1. 根据实验要求选定实验材料和仪器 2. 配制缓冲液 3. 制定提取方案 4. 制备细胞膜的特定成份 5. 使用适当的仪器检测提取成份 6. 分析讨论测量结果 （四）设计和制备不同比例细胞膜成份的膜，进行形态和结 构分析 1. 根据实验选定实验材料 2. 制备不同比例的试剂 3. 制备单分子膜、双层膜或多层膜 4. 分析界面和热力学性质 5. 原子力显微镜研究形态变化 6. 分析讨论测量结果 （五）生物膜提取成份和合成成份形成结构的对比研究 1. 选取生理状态下提取的脂混合，同时用合成的成份根据配比混合 2. 分别使用两种系统制膜 3. 记录分析两种情况下的界面和热力学性质 4. 原子力显微镜研究镀膜形态 5. 分析讨论测量结果 四、参考文献与资料 赵南明，周海梦. 生物物理学. 北京:高等教育出版社，2000 张龙翔，张庭芳. 生化实验方法和技术（二版）.北京;高等教育出版社,1991 Peter J. Quinn, Cedric Tessier, Dominique Rainteau, et al. Structure and thermotropic phase behaviour of detergent-resistant membrane  raft fractions isolated from human and ruminant erythrocytes.  Biochimica et Biophysica Acta. 2019, 1713:5-14 Luana Scheffer, Inna Solomonov, Markus Jan Weygand, et al. Structure of cholesterol/ceramide monolayer mixtures: implications to the  molecular organization of lipid rafts. J. Biophy. 2019,88:3381-3391 C. Yuan, J. Furlong, P. Burgos