月季的花药培养课件.pptxVIP

月季的花药培养 花中皇后月季又称“月月红”，自然花期5至11月，开花连续不断 ，通常扦插就可以成活。 知识回顾单倍体育种的过程？正常植株（2N）花药离体培养（N）单倍体植株（N）秋水仙素处理，使染色体翻倍植株（2N）特点：1 明显缩短育种年限2 后代植株都为纯合子。一、课题背景花的结构一、基础知识（一）被子植物的花粉发育花丝1 雄蕊花药：囊状结构，内有很多花粉2 花粉的概念:由花粉母细胞经过减数分裂形成的单倍体的生殖细胞.花粉发育过程小孢子母细胞花粉母细胞减数分裂小孢子单核居中期（小孢子四分体时期单核靠边期4个4个4个4个营养细胞花粉管细胞核有丝分裂双核期）生殖细胞生殖细胞核1个有分丝裂4个精子8个雌蕊 的结构基础知识活动1：阅读“被子植物的花粉发育”，回答下列问题：单 生殖 1．花粉是___倍体的_______细胞. 被子植物的花粉是在 中由 经过 分裂形成的。 2．花粉的发育要经历不同的时期： 花药 花粉母细胞减数2 小孢子母细胞（2n）（ ）个精子(n)减数（ ）分裂有丝（ ）分裂生殖（ ）时期（n）小孢子四分体营养（ ）细胞（n）（ ）细胞（n）居中生殖花粉管（ ）细胞核（n）（ ）细胞核（n）单核（ ）期（n）有丝（ ）分裂靠边双核期单核（ ）期（n）花药中的花粉花药中的花粉再分化 分化 脱分化 脱分化 丛芽 丛芽 愈伤组织 胚状体诱导生根（二）产生花粉植株的两种途径①②体细胞胚（胚状体）：在组织培养过程中，某些细胞在形态上转变为与合子发育成的胚非常相似的结构，发育过程亦与合子胚类似移栽原因：培养基中的激素种类及浓度配比（三）影响花药培养的因素1、材料的选择：⑴不同种类植物的诱导成功率不同。⑵同一种植物，亲本植株的生理状况对诱导成功率有直接影响。⑶合适的花粉发育时期：花期早期时的花药最佳。⑷选择最合适的花粉发育时期①不选择单核期之前花药原因：花药质地幼嫩，容易破碎；②不选择单核期之后花药原因：花瓣开始松动，给材料消毒带来困难困难；③挑选单核期花药方法：应当选择完全未开放的花蕾，菌少，易消毒。2、培养基的组成： 花药培养所采用的培养基各成分中植物生长调节剂的水平和配比起决定作用。⑴诱导愈伤组织或胚状体产生的培养基：广泛使用 2，4-D、IAA；⑵诱导分化的培养基常除去2，4-D而以IBA代之。 亲本植株的生长条件、材料的低温预处理、接种密度等对诱导成功率都有一定的影响。3、其他因素：讨论：　为什么花瓣松动会给材料的消毒带来困难？　为什么花瓣松动会给材料的消毒带来困难？　答：花瓣松动后，微生物就可能侵入到花药，给材料的消毒带来困难。三、 实验操作（一） 材料的选取1. 选择花药一般通过镜检来确定其中的花粉是否处于适宜的发育期。2. 最常用的方法：醋酸洋红法某些植物的花粉细胞核不易着色，需采用焙花青—铬矾法，这种方法能将花粉细胞核染成蓝黑色。70％的酒精浸泡30s（二）材料的消毒无菌水清洗花蕾吸干表面水分0.1％的氯化汞溶液 2-4 min无菌水清洗3-5次1.将花蕾用体积分数为70%的酒精浸泡30s2.无菌水清洗3.无菌吸水纸吸干花蕾表面的水分4.放入质量分数为0.1%的氯化汞溶液中2~4min（也可用质量分数为1%的次氯酸钙溶液或饱和漂白粉溶液）5.无菌水冲洗3~5次（三）接种和培养 灭菌后花蕾，要在无菌条件下除去萼片和花瓣，并立即将花药接种到培养基上。 在剥离花药时，要尽量不损伤花药（否则接种后，容易从受伤部位产生二倍体的愈伤组织），同时还要彻底去除花丝，因为与花丝相连的花药不利于愈伤组织或胚状体的形成。 每瓶接种花药7-10个，温度控制在25℃左右，不需要光照。幼小植株形成后才需要光照。 经过20-30天培养后，会发现花药开裂，长出愈伤组织或释放出胚状体。将愈伤组织及时转移到分化培养基上，以便进一步分化出再生植株。 如果花药开裂释放出胚状体，则一个花药内就会产生大量幼小植株，必须在花药开裂后尽快将幼小植株分开，分别移植到新的培养基上，否则这些植株将很难分开。 对培养出来的植株做进一步的鉴定和筛选。因为在花药培养中，特别是通过愈伤组织形成的花粉植株，常常会出现染色体倍性的变化。四、 结果分析与评价1、选材是否恰当 选材是否成功是花药培养成功的关键。应学会通过显微镜观察处于适宜发育期的花粉。 2、无菌技术是否过关 如果出现了污染现象，说明某些操作步骤，如培养基灭菌、花蕾消毒或接种等有问题。3、接种是否成功 如果接种的花药长出愈伤组织或释放出胚状体，花药培养的第一步就成功了。要适时转换培养基，以便愈伤组织或胚状体进一步分化成再生植株。课堂小结被子植物的花粉发育花粉花粉发育经历的时期月季的花药培养 基础知