各种聚合酶链式反应 PCR介绍 .pptVIP

不对称PCR（ asymmetric PCR ）：用于制备单链DNA PCR扩增所用的两条引物中，浓度受限制的只及高浓度的1%（或2%）。 经过PCR循环直到限制引物耗尽之前，扩增的引物是双链的DNA序列。而后，反应混合物中的另一种高浓度的引物，则利用限制引物合成的DNA链做模板，继续引导DNA合成。 这样模板链继续再循环，由高浓度的引物合成的DNA要比限制引物多得多，而且仍保持单链状态。 聚合酶链式反应 (Polymerase Chain Reaction) 根据细胞分裂中 DNA 半保留复制机理，在体外快速扩增某一特定 DNA 片段的方法。 PCR工作原理 以要扩增的DNA分子为模板， 以一对与模板5`末端和3`末端互补的寡核甘酸片段为引物 4种脱氧核糖核甘酸存在的条件下 依赖DNA聚合酶的酶促合成反应。 PCR特异性取决于引物和模板DNA结合特异性。 体外(试管中)扩增特异DNA片段短时间内即可将所需目的DNA片段扩增至100万倍以上 PCR技术 特点 敏感度高、特异性强、产率高、 重复性好、操作简便、快速 PCR体系基本组成 模板DNA： （102-5）拷贝 dNTP底物：20—200umol/L 特异性引物： 0.1—0.5 umol/L DNA聚合酶：Klenow T4 、 T7聚合酶 TaqDNA聚合酶:耐热