细胞融合与单克隆抗体2.pptxVIP

3.2.1 杂交瘤单克隆抗体技术的理论3.2.2 杂交瘤技术过程3.2.3 单克隆抗体的规模化生产3.2.4 单克隆抗体的改造和应用 3.2 单克隆抗体技术免疫系统由淋巴器官、组织、细胞共同构成。免疫器官：中枢免疫器官：骨髓、胸腺、（鸟、禽）法氏囊外周免疫器官：淋巴结、脾、扁桃体等免疫细胞：造血干细胞、淋巴细胞（T、B、NK）、白细胞等。免疫分子：抗体、补体、细胞因子、干扰素等。3.2 单克隆抗体技术外周淋巴器官中枢淋巴器官扁桃体，淋巴结胸腺淋巴结脾肠系膜淋巴结骨髓淋巴管T细胞和B细胞的分化3.2 单克隆抗体技术T细胞介导的免疫应答一、抗原的识别与递呈（感应阶段）二、反应阶段三、效应阶段四、细胞免疫的生物学效应3.2 单克隆抗体技术一、抗原的识别与递呈（感应阶段）（一）APC对抗原的递呈（二）T细胞的双识别3.2 单克隆抗体技术抗原呈递细胞 (antigen-presenting cell )一种特殊类型的细胞，携带细胞表面MHC（主要组织相容性复合体）II类分子，涉及抗原的加工和呈递给辅助T细胞。3.2 单克隆抗体技术3.2 单克隆抗体技术二、反应阶段T细胞活化的第一信号由TCR 识别并结合抗原性多肽传递抗原信号；CD4、CD8分子分别识别MHC-II类和MHC-I类分子。3.2 单克隆抗体技术 T细胞活化的第二信号又称协同刺激信号，由众多协同刺激分子与相应受/配体结合介导，主要是B7/CD28分子对之间的作用。3.2 单克隆抗体技术T细胞在双信号的激发下，表达细胞因子及相应受体，进一步促进T细胞活化、增殖。若TCR特异性识别并结合抗原肽的过程中缺乏协同刺激信号，则T细胞被诱导呈不应答。3.2 单克隆抗体技术（三）T细胞的增殖和分化CD4+ TH 分化为：　TH1 CD8+ CTL（TC )分化为：　有杀伤效应的CTL （TC )3.2 单克隆抗体技术Tc杀伤细胞3.2 单克隆抗体技术细胞免疫应答3.2 单克隆抗体技术体液免疫应答3.2 单克隆抗体技术抗原：一类能够刺激动物机体的免疫系统，诱导发生免疫 应答，产生体液免疫的抗体和（或）细胞免疫的效 应淋巴细胞，并在体内外与之反应的物质。 3.2 单克隆抗体技术能起抗原作用的各类物质必须具备如下特性： (1)外源性 机体以往从未接触过的外源异物或异体；(2)结构性 分子量在10，000以上的大小，分子表面有稳定 的环状结构基团(而非线状基团)作为识别位点；(3)特异性 由于抗原有不同的决定簇，产生相应的抗体与 抗原间的反应是特异性的。 3.2 单克隆抗体技术抗体：在对抗原刺激的免疫应答中，B淋巴细胞产生的一 类糖蛋白,能与相应抗原特异的结合，产生各种 免疫效应（生理效应）的球蛋白。3.2 单克隆抗体技术抗体 (Ig) :（Immunoglobulin)抗体分类： IgG、 IgA、 IgM、 IgD、 IgE抗体结构3.2 单克隆抗体技术 抗体作用的机理中和反应聚集反应沉淀反应补体活化3.2 单克隆抗体技术 每个B淋巴细胞只能产生一种针对它能够识别的特异性抗原决定簇的抗体，而由这一个细胞通过有丝分裂繁殖形成的细胞群称为“克隆”，由这一个克隆系产生的抗体称为单克隆抗体3.2 单克隆抗体技术3.2.1单克隆抗体技术的基本理论 正常淋巴细胞（如小鼠脾细胞）具有分泌抗体的能力，但不能在体外长期培养，瘤细胞（如骨髓瘤）可以在体外长期培养，但不分泌抗体。于是Kohler和Milstein 于1975年将两种细胞杂交而创立了单克隆抗体技术，获1984年诺贝尔奖。 3.2 单克隆抗体技术Georges J. F. Kohler César Milstein3.2 单克隆抗体技术单克隆抗体 (monoclonal antibody)随着在研究上应用日益广泛，对抗体的数量和质量 （专一性）要求越来越高数量多: 传统的实验动物马,兔等免疫不方便 质量高: 大动物免疫难以做到单克隆3.2 单克隆抗体技术3.2 单克隆抗体技术单克隆抗体生产技术 (杂交瘤技术) 用细胞融合技术获得单克隆抗体综合了两方面优势：淋巴细胞肿瘤: 能不断增殖，没有产生专一抗体能力。从脾脏得到淋巴细胞: 能产生专一抗体，不能不断增殖。3.2 单克隆抗体技术3.2.1.1杂交瘤技术的基本原理利用细胞融合技术，将已免疫过的B细胞与骨髓瘤细胞融合，在由此形成的单个杂种细胞中，B细胞提供产生单一型抗体的遗传信息，瘤细胞提供连续增殖的遗传信息。因此这种杂种细胞既能产生抗体又能无限繁殖。3.2 单克隆抗体技术3.2.1.2 单克隆抗体的特性 高度均一性： 纯度很高的均一性抗体 高度专一性： 只对抗原分子上某一抗原决定簇起反应 大量产生及稳定性： 杂交瘤细胞能在体内外无限繁殖之传代 3.2 单克隆抗体技术3.2